中文摘要：

感音神经性耳聋严重影响人类的生活质量，其发病的分子机制尚未阐明。锌带蛋白NOB1可能在基因转录、细胞凋亡、细胞周期调控、肿瘤发生等多种生理病理过程中发挥重要作用。本课题组率先制备了NOB1的单克隆抗体，发现NOB1在耳聋哺乳动物内耳毛细胞中的表达显著上调，且NOB1的表达强度与毛细胞凋亡密切相关。因此，推测NOB1可能通过调控细胞凋亡在耳聋发生发展中扮演重要角色。本项目拟利用基因转染技术改变NOB1在耳蜗毛细胞中的表达，借助体内外实验研究NOB1在耳蜗毛细胞凋亡中的作用，通过细胞凋亡PCR芯片及阻断剂干预实验探索NOB1参与耳蜗毛细胞凋亡的分子机制。以期证明NOB1是一个新的耳聋相关基因，为深入理解耳聋发生发展的分子事件，探讨新的基因治疗方法奠定基础。

结论摘要：

感音神经性耳聋严重影响人类的生活质量，其发病的分子机制尚未阐明。本课题组在率先制备了锌带蛋白NOB1的单克隆抗体，发现噪声可诱导NOB1在哺乳动物耳蜗组织表达上调的基础上，推测NOB1可能通过调控细胞凋亡在耳聋发生发展中扮演重要角色。本项目通过构建NOB1的慢病毒干扰载体及腺病毒的NOB1高表达载体，利用基因转染技术改变NOB1在耳蜗毛细胞中的表达，借助体内、外实验研究NOB1在顺铂诱导的耳蜗毛细胞凋亡中的作用，并通过细胞凋亡PCR芯片探索NOB1参与耳蜗毛细胞凋亡的分子机制。本课题的实验结果表明①应用顺铂诱导离体培养的耳蜗Corti器发生凋亡，并通过NOB1和DAPI双重免疫组化染色，观察到NOB1在凋亡的耳蜗毛细胞中表达明显增强。② 通过体外培养人肾近曲小管上皮细胞系HK-2来模型模拟内耳毛细胞，利用构建的NOB1慢病毒及腺病毒载体转染体外培养的HK-2细胞上、下调NOB1的表达，采用流式细胞技术检测到过表达NOB1可使HK-2细胞发生凋亡的比率显著增加，提示NOB1过表达可以诱导细胞凋亡的发生。③ 我们通过大鼠耳蜗中阶注射的方法，将NOB1慢病毒载体成功转染至耳蜗毛细胞，通过RT-PCR及Western blot方法证实NOB1在基因及蛋白水平被抑制，并观察到下调NOB1可以显著降低顺铂诱导的耳蜗外毛细胞损伤，以及可以减轻顺铂诱导的大鼠听力损伤。这一结果证实了NOB1对大鼠药物性耳聋的发生具有一定的保护作用。④ 通过细胞凋亡PCR芯片筛选到NOB1相关的细胞凋亡基因。结果提示在大鼠耳蜗内下调NOB1的表达可以使多个凋亡相关基因发生变化，其中下调2倍的基因有9个，分别为Abl1、Akt1、Anxa5、Bcl2l1、Casp12、Cflar、Mapk8ip1、Tnfrsf11b、Tnfrsf1a，证实了NOB1基因的下调可以抑制耳蜗内凋亡基因的表达，从而起到保护听力及耳蜗毛细胞的作用，但具体的相互作用机制还需进一步探讨及相关实验的完善。我们顺利完成了课题任务，达到预期目标，证明了NOB1是一个新的耳聋相关基因，为基因治疗提供了新的靶点，对感音神经性耳聋机制的阐明具有重要意义。