中文摘要：

树突状细胞（dendritic cells，DC）的功能与其成熟状态密切相关，未成熟DC表达低水平的共刺激分子，通过诱导T细胞凋亡或者诱导调节性T细胞产生等，诱导特异性免疫耐受。DC的成熟依赖NF-κB转录因子活化，是其诱发T细胞反应中的一个重要步骤。其中，NF-κB抑制性蛋白（IκB）激酶2（IKK2）的作用最为关键。所以，本课题通过体外培养获得受者大鼠骨髓源性DC，用IKK2的显性负性突变体（IKK2dn）转染DC，抑制NF-κB转导通路从而抑制DC的成熟。负载供者抗原后，与受者T细胞共培养，并将转染IKK2dn DC诱导产生的CD4+CD25-Trg T细胞于肾移植术前一周输入受者大鼠体内，术后观察其免疫反应状态及各组大鼠生存时间。从而探讨IKK2dn转染受者来源的DC诱导免疫耐受的特性及机制，为临床应用受者来源DC诱导尸肾移植免疫耐受奠定理论基础。

结论摘要：

本项目通过转染Adv-IKK2dn基因并负载供者抗原的受者DC诱导产生的CD4+CD25- T细胞回输至受者体内，观察其是否能延长同种异体肾移植大鼠存活时间，并探讨了可能的机制。我们首先获取和培养受者Lewis大鼠骨髓源性DC，转染IKK2dn基因并负载BN大鼠可溶性抗原，与BN大鼠的T细胞初次混合淋巴细胞反应（MLR），72h后采用免疫磁珠分选法筛选CD4+CD25- T细胞。肾移植受者为Lewis大鼠，分为初始T细胞组、Adv0-CD4+T细胞组、CD4+CD25- T细胞组、排斥组，术前7d分别输注1×107个初始CD4+T细胞、Adv-0-DC诱导产生的CD4+CD25- T细胞、Adv-IKK2dn-DC诱导产生的CD4+CD25- T细胞和等量生理盐水，供者均为BN大鼠。另设第三方供者组，术前处理同治疗组，供者为wistar大鼠。移植术后观察各组大鼠存活时间和发生排斥反应情况；测定受者T淋巴细胞增殖能力；检测血清白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)以及转化生长因子β（TGF-β）表达水平；监测血肌酐(Cr)水平；病理学检查评定排斥级别。结果我们发现CD4+CD25- T细胞组肾移植大鼠生存时间为（28.5±2.36）d，较其他各组显著延长(P<0.01)；与其他各组相比，CD4+CD25- T细胞组表达高水平 IL-10和TGF-β(P<0.05或P<0.01)；与排斥组、Adv0-CD4+T细胞组、第三方供者组相比，CD4+CD25- T细胞组低表达IL-2和IFN-γ（P<0.05）；CD4+CD25- T细胞组T淋巴细胞的增殖能力明显低于其他4组(P<0.05或P<0.01)；病理学检查CD4+CD25- T细胞组发生排斥反应的病理级别较低。通过本项目的研究，我们发现转染IKK2dn基因并负载供者抗原的受者DC诱导产生的CD4+CD25-T细胞回输可以延长同种异体肾移植大鼠生存时间，具有针对供者的特异性，其机制可能与诱导的IL-10、TGF-β的高分泌有关。这可以为进一步完善Adv-IKK2dn转染DC诱导免疫耐受理论，并为临床应用转染IKK2dn诱导肾移植免疫耐受的可行性奠定理论基础。