中文摘要：

制备了海南坡鹿外周血白细胞总RNA.利用SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript) 技术, 建成原始cDNA文库.滴度为1. 59 ×1010 cfu/mL , 扩增后的文库滴度为7. 4 ×1012 cfu/mL, 为海南坡鹿重要功能基因的研究建立了重要的基础平台. 采用RT-PCR和RACE扩增海南坡鹿HSF1cDNA全长(GENEBANK No. FJ358600)，生物信息学分析结果显示，hdHSF1 cDNA全长2036 bp，含有1个1578bp的开放阅读框，编码525个氨基酸, 氨基酸序列与赫里福德牛、人、小鼠同源性分别为97.52%、89.25%、83.84%.在转录调节区，多处发生突变，相关功能实验验证正在进行.构建了原核表达载体，经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE、用抗His单克隆抗体进行Western blot 分析, 得到一条约62kD特异性抗体结合带，表明海南坡鹿HSF1原核表达载体成功构建并表达.另外，构建了真核表达载体pEGFP-hdHSF1, 以及一系列RNA干扰载体.