中文摘要：

移植物抗宿主病（GVHD）严重危害造血干细胞移植患者的生活质量，而移植物抗肿瘤（Graft versus tumor,GVT）效应可降低移植后肿瘤的复发。因此，在预防GVHD的同时保留GVT效应是提高移植质量的关键。研究显示利用天然调节T细胞的免疫抑制作用，可预防GVHD并能保留GVT，但其纯化和扩增难度大，实用性差。1型调节T细胞（type-1 regulatory T cells, Tr1）可在IL-10的条件下诱生，同样具有免疫抑制作用。预实验提示，Tr1可诱导更强的抗原特异性免疫抑制效应。本项目拟应用IL-10基因修饰的树突状细胞体外诱生Tr1细胞，并应用流式细胞术，共聚焦显微镜及动物移植模型等技术对Tr1细胞的生物特性及对GVHD及GVT的影响进行研究，以阐明Tr1的生物特性及其预防GVHD并保留GVT效应的可行性。结果不仅有重要的科学意义，也有重要的社会和经济价值。

结论摘要：

目的 探索应用IL-10基因修饰的树突状细胞（DCs）体外诱导1型调节性T细胞（Tr1）的可行性，同时对其免疫抑制功能及GVHD发生的影响进行初步的观察。方法构建IL-10慢病毒载体，转染鼠DCs（DCIL-10）。CD4+T细胞与DCIL-10共培养，诱导Tr1细胞。应用淋巴细胞增殖实验及混合淋巴细胞反应（MLR）对Tr1细胞的免疫抑制效应进行观察，同时应用造血干细胞移植（HSCT）动物模型观察Tr1细胞对GVHD发生的影响进行了初步观察。 结果成功地构建IL-10慢病毒载体并转染DCs，检测提示转染的DC细胞能够表达IL-10; 应用DCIL-10与CD4+ T细胞共培养诱导Tr1细胞。结果显示，体外诱导的Tr1细胞表达CD4、CD25而不表达Foxp3，符合Tr1细胞的免疫表型; 在淋巴细胞增殖试验中，在Tr1E为41，21以及11时，能明显地抑制效应细胞的增殖（P<0.05）。在MLR中，在Tr1E为4:1和2:1 时，OD值分别为0.36和0.69，明显低于对照组（P<0.05）。提示应用IL-10基因修饰的树突状细胞体外诱导的Tr1细胞能够明显地抑制T淋巴细胞的增殖，且呈剂量依赖性。在HSCT实验中，受体鼠随机分成以下组别A组为对照组，照射非移植组；B组为仅输注BMC组；C组输注BMC+Tr1组，根据Tr1细胞的不同剂量分为C1组(4×106）；C2组(2 × 106）；C3组(1 × 106）以及C4组(5 × 105）。结果，对照组小鼠中位数生存8.21天，全部死于造血衰竭；B组小鼠存活15.67天，全部死于GVHD；而同时注射了Tr1细胞的C组小鼠的存活时间明显长于A,B两组（P<0.05）。各组GVHD的发生率显著低于B组。C1,C2和C3组小鼠的生存时间明显长于C4组。提示，Tr1细胞能够显著地降低GVHD的发生率和严重程度，而且呈剂量依赖性。结论应用IL-10基因修饰的DC体外诱导Tr1细胞是可行的，Tr1细胞具有显著的免疫抑制活性, 可明显地抑制异体淋巴细胞反应所致的GVHD，对防治异基因造血干细胞移植中GVHD的发生具有治疗作用。