中文摘要：

肿瘤免疫治疗有望进一步清除患者体内微小残留病，降低肿瘤复发，已成为肿瘤治疗的重要手段。但这一疗法因大多数肿瘤抗原不明确而受到限制。肿瘤细胞胞外体(Tumor cell-derived Exosomes,TEX)负载肿瘤细胞抗原，在体内能诱导抗肿瘤免疫效应，但效率较低，难以达到治疗肿瘤的效果。因此，增强TEX所诱导的抗肿瘤效应是开发以TEX为基础的高效肿瘤疫苗的关键。预实验结果显示，TEX能够在体外靶向结合树突状细胞（DC），其靶向结合的DC(DCEXO)可诱导较TEX更强的抗肿瘤效应，但其生物学特性以及作用机制尚未完全明了。本课题拟应用蛋白二维电泳，共聚焦显微镜及肿瘤动物模型等技术对TEX靶向结合DC的机制，DCEXO生物学特性及其诱导的抗肿瘤效应进行研究，以阐明DCEXO的生物特性及抗肿瘤免疫效应。结果不仅具有重要的科学意义，同时为开发以TEX为基础的高效肿瘤疫苗提供理论依据。

结论摘要：

目的 探索TEX靶向结合DC的生物学特性。应用质谱及肿瘤动物模型等技术对TEX靶向结合DC的生物特性及其诱导抗肿瘤效应进行研究。结果 电镜下Raji细胞胞外体（EXOraji）为直径50-100nm的囊泡状结构，圆形或椭圆形，外有脂质膜包裹，内为低电子密度物质，且视野中分布均匀。表型分析显示，EXOraji及EG7肿瘤细胞胞外体（EXOEG7）均负载肿瘤细胞膜分子；Western blot提示，EXORaji负载HSP70及ICAM-1分子；质谱分析显示，EXORaji蛋白占Raji肿瘤细胞的70.56 %，有58种为EXORaji所特有，这些蛋白参与细胞的各种生物学功能。结果还显示，TEX能在体外结合DC，并能在DC内保留80小时以上，可满足DC递呈抗原的需要。细胞毒实验显示，TEX靶向结合的DC则能较胞外体更强的抗原特异性的抗淋巴瘤CTL效应，EXOEG7免疫小鼠，其外周血活化CTL为0.48%明显低于免疫DCEXO小鼠（1.48%）。细胞毒杀伤实验显示， EXOEG7免疫小鼠脾T细胞在 E:T 比25:1时对 靶细胞杀伤率为24%, 明显低于免疫DCEXO小鼠（49.23%）。研究还提示，免疫未致敏DC的小鼠T细胞则无任何杀伤活性，T细胞对EL4靶细胞也无任何杀伤活性。肿瘤细胞攻击实验显示，免疫EXOEG7的小鼠的肿瘤发生率为63%，明显高于免疫DCEXO小鼠（13%）。提示，DCEXO诱导更强的抗肿瘤免疫保护。而给去除DC的小鼠接种EXOEG7不能诱导抗肿瘤免疫效应，而接种DCEXO则能诱导抗肿瘤免疫效应，提示，EXOEG7的抗肿瘤免疫依赖DC。同时，对荷瘤小鼠接种EXOEG7及DCEXO结果提示，接种EXOEG7未能见到小鼠肿瘤的消退，而接种了1 × 10^6, 2 × 10^6, 和4 × 10^6 DCEXO 小鼠中分别有 62.5%, 87.5% 和100%的荷瘤小鼠肿瘤发生了消褪，提示TEX抗肿瘤免疫效应低，不能发挥治疗肿瘤的作用，而其体外靶向结合的DCEXO能发挥治疗肿瘤的作用。结论 肿瘤细胞能分泌TEX，TEX携带有肿瘤细胞的膜分子，胞浆蛋白，粘附分子以及一些参与免疫调节作用的分子，提示TEX可能成为肿瘤细胞的相关抗原的来源。同时TEX在体外可以致敏DC，而使得后者获得更强肿瘤抗原特异性的抗肿瘤免疫效应，可望开发成为高效的抗肿瘤疫苗。