中文摘要：

再障是细胞免疫异常主导的疾病，但在再障发病中起重要作用的肽特异性CTL细胞的生物学特性及诱导其产生的自身抗原肽尚未明确。再障患者血清学筛查到Kinectin抗体出现频率最高，提示Kinectin是再障发病中被异常递呈的自身抗原，它存在B细胞表位，诱导产生抗体，也可能同时存在T细胞表位，诱导产生抗自身CTL。本项目首选Kinectin分子，预测其HLA-A2限制性表位，合成抗原肽，体外诱导产生肽特异性CTL,选对造血干细胞有杀伤作用的CTL相应肽段构建MHC-肽五聚体，以五聚体检测再障患儿骨髓中Kinectin 肽特异性CTL细胞；并结合免疫磁珠分选肽特异性CTL细胞，以荷肽DC及细胞因子刺激其扩增，结合细胞杀伤试验、CTL穿孔素、颗粒酶B测定、胞内细胞因子检测、细胞表型分析等方法 ，研究肽特异性CTL细胞生物学特性及其调控，阐明其在再障发病中的作用；为再障针对性的免疫调节治疗提供基础。

结论摘要：

[目的] 证明再障为细胞免疫异常性疾病，其中起重要作用的是自身抗原肽特异性CTL细胞，研究Kinectin肽特异性CTL细胞在再障发病机制中的作用。[方法]检测分析再障儿童的骨髓、外周血免疫学指标；多参数分析预测Kinectin HLA-A2限制性表位，合成抗原肽，用T2结合试验验证预测的抗原肽与HLA-A*0201分子是否能稳定结合；以抗原肽体外诱导DC， DC诱导T细胞产生肽特异性CTL,构建相应的MHC-肽五聚体，以五聚体检测肽特异性CTL细胞 [结果]再障的免疫损害以CTL细胞近期活化为著；再障患儿骨髓的造血干细胞、造血祖细胞减少在免疫抑制治疗后可恢复；验证Kinectin分子上的10条预测的抗原肽中8条抗原肽P10，P1，P5，P2，P4，P9，P3，P6与HLA-A*0201分子能稳定结合，其中6条肽P2、P10、P3、P5、P6、P1刺激的DC细胞在PBMC中均成功诱导出了肽特异性CTL细胞，比例介于2.66%至6.86% 之间。[结论] 再障是细胞免疫异常性疾病，骨髓为其免疫损害的靶器官，儿童再障造血干祖细胞数量的减少可能为免疫损害的结果。Kinectin分子存在T 细胞抗原表位，本研究得到的6条抗原肽诱导出的肽特异性CTL。建立了肽特异性CTL的诱导方法和MHC肽五聚体检测肽特异性CTL的方法，为进一步研究这些肽特异性CTL在再障发病机理中的作用提供有力的工具。