针对小反刍兽疫(PPR)仍未获得系统有效的控制方法,本研究拟研制实用高效的PPR植物疫苗,拟分别将PPR保护性F、H基因和经密码子优化的表位基因与佐剂基因LTB融合,添加核糖体结合位点后作为目的基因,以eGFP/GUS融合基因为报告基因1)构建叶绿体基因组定点表达载体,其含有基因删除系统lox/frt,培育无选择标记母性遗传的安全转基因系统;2.以pBI121为基本表达载体,添加核基质附着区MAR、内质网驻留蛋白信号序列KDEL,木薯叶脉花叶病毒CsVMV启动子替换CaMV35S启动子,建立核基因组的高效表达载体。继而采用冻融法分别导入感受态的根瘤农杆菌EHA105和LBA4404,以叶盘法侵染苜蓿叶柄、下胚轴、原生质体,确定高效转化条件,再生完整植株,经Southern和Western blot检测,饲喂小鼠,进行血凝法和血清ELISA法检验,获得有较高免疫原性的PPR转基因植物疫苗。
英文主题词Peste des petits ruminants virus;Plant vaccine;Alfalfa;Construction of expression vectors;Chloroplast Transformation;