中文摘要：

新城疫是由新城疫病毒引起的禽类急性、高度接触性传染病。近年来, 藏鸡新城疫发病率一直居高不下, 而且疫苗免疫的鸡群亦出现感染，其原因是由于鸡新城疫病毒（NDV）的变异，还是超强毒株的出现还不清楚。本项目拟从西藏地区分离新城疫病毒(NDV)野外毒株，用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增其F基因重要的功能区片段，同时进行克隆和序列测定；利用生物信息学技术构建NDV的遗传进化树，分析其遗传和进化关系，开展NDV分子流行病学调查，筛选出NDV流行的病毒株，研究其生物学特性，并以此毒株作为标准疫苗株研制针对藏鸡新城疫灭活疫苗，探求合理的免疫程序，以期提高藏鸡新城疫免疫水平、控制藏鸡新城疫的发生，促进我区藏鸡养殖业的发展。

结论摘要：

从采集的藏鸡病料中分离鉴定NDV并确定分离株的毒力。采用RT-PCR方法克隆藏鸡NDV分离株F基因，测序后进行序列分析，并进行进化分析。结果显示共分离鉴定出F5、FX10、F20、F74、F75、F17、F72、FH2等8株NDV，其中F17、F72、FH2为强毒株，其余5株为弱毒株。F基因序列表明，8株病毒F基因ORF均为1662bp，编码553个氨基酸，强毒株ORF编码产物含有12个半胱氨酸残基，弱毒株有13个半胱氨酸残基，比强毒株在27位(强毒株C27变为R27)多了1个半胱氨酸残基；有6个潜在的糖基化位点。分离的8株NDV与GenBank中发表的20株NDV参考毒株比较表明，F蛋白氨基酸序列变异位点较多，主要集中在8-30，97-124，45，385-386，402-403，479-494，509-520位氨基酸处，强毒株AA替代较集中，而弱毒株保守区较多且AA替代较分散。分离NDV株之间的NDV F基因编码区核苷酸序列同源性为83.5%～99.9%，其中强毒株之间同源性为95.2%～99.4%，弱毒株之间同源性为99.4%～99.9%。分离NDV株之间F基因编码的氨基酸同源性为87.5%～99.5%，其中强毒株之间同源性为95.3%～98.2%；弱毒株之间同源性为98.6%～99.5%。进化分析显示，3株强毒株均为基因Ⅶ型，5株弱毒株均为基因Ⅱ型。说明在藏鸡中流行基因Ⅶ型和基因Ⅱ型NDV，藏鸡感染NDV后引起藏鸡死亡的主要是基因Ⅶ强毒株，与国内学者研究的结果一致。　　　从分离的弱毒株中优先出FX10病毒株，制成灭活油乳苗，经检验各项指标符合兽用生物制品质量标准。免疫效果能达到与市售苗相同的免疫效果，说明从感染藏鸡分离的FX10弱毒株，具有良好的免疫原性和反应原性，完全可以成为疫苗候选株。