中文摘要：

NKT细胞(同时表达TCR和NK标志的细胞群)是一群重要的免疫细胞，研究发现其具有明显的抑制自身免疫病、抗感染和抗肿瘤效应。NKT细胞在体内含量甚微，亚群众多，由于缺乏有效的体外扩增方法，目前NKT功能研究尚不深入。本课题组通过表达特定抗原的树突状细胞免疫小鼠后，分离脾脏NKT细胞并进行体外抗原诱导，能大量扩增一群具有抗原特异性的NKT。该群体表达NK1.1,DX5,TCR(alpha/betta)和低丰度CD8,不表达CD4，不与CD1d-alpha-GalCer Tetramer反应，胞内含有丰富的功能性颗粒，初步确定为非CD1d限制性CD8阳性NKT亚群，并具有明显的NK细胞活性和抗原特异性CTL活性。功能测试表明该细胞能强烈抑制抗原特异性CD4的活化和增殖，并显示具有MHC-I抗原特异性和依赖性。本研究拟对该细胞的生物学特性进行深入研究并揭示其抗原特异性负向调节作用的机制。

结论摘要：

作为一类兼具T细胞和NK细胞特征的免疫细胞，NKT细胞在免疫调节和免疫稳态形成中发挥了重要作用。在以小鼠为动物模型的研究中，目前研究的重点多集中于对经典NKT细胞（表达Vα14Jα18类型TCR的NKT细胞，又名iNKT）的研究，而对具有多样可变TCR的NKT细胞（以下简称为vNKT细胞）的功能尚不清楚。本实验以GFP-DC和OVA-DC作为携带内源性抗原的DCs刺激正常小鼠的免疫系统，借助T2小鼠CD4 T细胞和T1小鼠的CD8 T细胞对携带特异性抗原的DCs的免疫反应，通过对效应性T细胞增殖能力和细胞因子分泌的检测，体现NKT细胞对免疫系统的抗原特异性调节作用。研究发现，免疫两次后的正常小鼠脾脏细胞中，非CD1d限制性的NKT细胞数量显著增多。对免疫后小鼠脾脏细胞内非CD1d限制性的NKT细胞依据CD8分子的表达强度进行分选，并与免疫的GFP-DC或OVA-DC共培养，发现CD8弱阳性NKT细胞（以下称为CD8dim vNKT细胞）能够经历抗原特异性的活化和扩增。在体内和体外的抗原递呈模型中，T2小鼠的CD4 T细胞和T1小鼠的CD8 T细胞被用作免疫应答强度的指示细胞，GFP-DC和OVA-DC被用作DCs，我们发现，当体系中加入与CD8dim vNKT细胞TCR识别的抗原相匹配的DCs时，T细胞的免疫反应受到了抑制。活细胞工作站观察表明，这种抑制作用源于CD8dim vNKT细胞对携带其TCR识别的抗原的DCs的杀伤作用，且添加可被MHC-I类分子结合的无关对照肽后，这种杀伤作用无法体现。本研究揭示携带内源性抗原的DCs能够刺激一个NKT细胞亚群——CD8dim vNKT细胞的活化和增殖，后者能够抗原特异性和MHC-I类分子限制性的杀伤DCs，并以此抑制CD4 T细胞和CD8 T细胞介导的免疫反应。