中文摘要：

CyclinD1是细胞进入增殖周期合成的第一个周期蛋白，在许多肿瘤细胞中过度表达，促进肿瘤细胞增殖，是肿瘤防治的一个重要靶点。申请人研究组曾首次以CyclinD1为靶点研制了具有抗肿瘤效应的抗CyclinD1人源胞内单链抗体，但由于该抗体的亲和力较低，限制了其进入临床进程。为了提高该抗体的亲和力，高效抑制肿瘤细胞增殖，本课题将该抗体进行定向进化，即以该抗体基因为模板，利用核糖体展示技术结合易错PCR，获得高亲和力的抗CyclinD1单链抗体,进而成功对该抗体进行了可溶性表达和纯化，体外活性表征等。分析结果显示该抗体亲和力较亲本提高近40倍，能够抑制抗Cyclin D1多克隆抗体与cyclin D1的结合活性，并且通过Western blot、免疫荧光及免疫共沉淀实验表明该高亲和力抗体能够与肿瘤细胞内Cyclin D1结合，从而为这一新型胞内抗体未来进入临床奠定基础。