中文摘要：

肿瘤细胞恶性增殖的主要原因之一是细胞周期失控。CDK4是细胞进入增殖周期第一个被激活的周期蛋白依赖性蛋白激酶，它的活化状态是细胞能否进入增殖周期的关键。CDK4在许多肿瘤细胞中过度表达和过度活化，促进肿瘤细胞增殖，是肿瘤防治的一个潜在靶点。本项目在国内外首次利用胞内抗体捕获技术筛选制备了抗人CDK4胞内单链抗体，并对其表达水平、体内外抗肿瘤效应等进行了研究。本项目利用胞内抗体捕获技术筛选到亲和力达2×10(-8) mol/L的特异性结合人CDK4的单链抗体；以该抗体基因为模板，RT-PCR引入相应胞内定位信号后即获得抗人CDK4胞内单链抗体基因，构建其肿瘤特异性真核表达载体，体外转染肿瘤细胞实验表明，该胞内抗体在细胞内得到高水平表达和预期定位，使得G1期细胞比例较对照组增加近22%，S期细胞比例较对照组下降近14%，凋亡细胞百分比较对照组提高了近13%，体外抑瘤率达40%；裸鼠体内荷瘤实验结果表明，研制的胞 内抗体能够抑制体内乳腺癌瘤体生长，抑瘤率达50%以上。上述结果表明具有较好抑瘤效应的抗人CDK4胞内抗体筛选研制成功。该抗体的成功研制为肿瘤基因治疗提供了理论基础和实验依据。