中文摘要：

本项目以传统中医药理论为基础，以经典小复方四逆散为研究对象，选择方中最小配伍单位-药对为关联点，从全方-药对-单味药材-化学成分单体水平进行多层次的深入研究工作，建立四逆散中各单味药材、药对及全方的体外化学成分液相色谱指纹图谱；建立四逆散中各单味药材、药对及全方的血清化学动态图谱；考察四逆散中各单味药材、药对及全方的抗肝损伤药效，将血清化学动态图谱与药效结果联系起来，建立谱效关系，确定四逆散抗肝损伤的主要药效物质；考察四逆散抗肝损伤有效成分群的多组分药代动力学行为，对各有效成分药时数据进行整合，最大程度表征复方整体动力学特征；对比有效成分单体与其在单味药材、药对及全方中药代动力学行为差异，进一步研究四逆散抗肝损伤有效成分群的作用机理；再将药动学研究与血清化学动态图谱结合起来，为研究中药复方在体内的整体动态过程提供新方法。

结论摘要：

本项目以经典小复方四逆散为研究对象，以传统中医药理论为指导，选择方中最小配伍单位-“药对”为关联点，从全方-药对-单味药材-化学成分单体水平进行多层次地深入研究工作，探究四逆散的配伍机理和抗肝损伤药效物质基础。1.四逆散化学成分研究。利用液质联用技术，测定四逆散中各单味药材、药对及全方的体外化学成分谱，共鉴定出31种化学成分。对比各单味药材、药对与四逆散全方的化学成分谱发现，四逆散在配伍过程中没有产生新成分。但芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草酸、柚皮素、柴胡皂苷a在四逆散中的含量均高于其在各单味药材中。四逆散体外化学成分的定性定量研究为探讨四逆散的配伍机理，揭示四逆散的药效物质基础奠定基础。2.四逆散入血成分动态变化研究。建立四逆散的含药血浆动态图谱，监测化学成分群在体内的实时、整体、动态变化情况。采用UPLC-MS/MS法研究了四逆散进入体内的活性成分及其代谢物谱。通过与对照品和文献中质谱数据对照，在含药血浆中共检测到23个入血成分，其中，12个成分以原型方式入血，其余11个成分为代谢产物，初步推测出其中10个代谢物。研究不同时间点入血成分的动态变化情况，以考察中药化学成分在体内的动态变化规律。3.四逆散抗肝损伤药效作用研究。采用一次性腹腔注射40 %四氯化碳所致急性肝损伤为药理模型，测定造模后24 h的大鼠血清和肝组织中生化指标含量以及观察肝脏的病理学改变，考察四逆散及其4个药对抗肝损伤的药效作用机理。结果发现，四逆散全方抗肝损伤作用最全面，减轻肝组织损伤效果最佳，从药效学角度体现了其组方配伍的科学性和合理性。4.四逆散抗肝损伤谱效关系研究。利用现代计算机信息技术将反映有效成分群的化学成分图谱与药效结果联系起来，建立谱效关系，结果芍药苷、柚皮苷、柴胡皂苷a和甘草次酸与药效相关性较大，作为四逆散抗肝损伤的药效物质基础。5.四逆散抗肝损伤有效成分在大鼠体内的药动学研究。在确定四逆散抗肝损伤药效物质的基础上，建立了UPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中的芍药苷、柚皮苷、柚皮素和甘草次酸的浓度，方法的专属性、线性、日内日间精密度和准确度及稳定性均符合相关规定的要求。比较灌胃给予化合物单体、单味药材和四逆散全方后，四个有效成分在大鼠体内药动学行为的差异，以揭示有效成分在体内的作用本质。