目的 在发现我国B19 病毒基因有特征性变异的基础上,探讨VP1基因变异对表达蛋白结构及免疫的影响。方法 将B19-XA 株VP1基因克隆表达,通过蛋白纯化、免疫动物、电镜和蛋白质质谱技术,分析表达蛋白的氨基酸序列、空间结构、抗原位点及动物免疫反应。结果 ①获得B19-XA株VP1基因的重组表达质粒及高度纯化的VP1、VP1u蛋白。②获得2株VP1蛋白的单克隆抗体(效价1:128000)。③首次揭示B19-XA株VP1基因的重要变异引起蛋白质一级、二级结构及重要功能位点变化。圆二色谱仪测定结果显示B19-XA VP1与HV株VP1蛋白的无规线团分别达46.1%和37.2%,提示B19-XA VP1可变性大,存在磷酸酶A2位点可使机体产生多种抗体。④ B19-XA VP1蛋白具有抗原活性,免疫动物产生高滴度抗体。⑤首次发现B19-VP1u致动物心、肝和关节滑膜病变。 ⑥申请国家发明专利2项,发表论文4篇,培养研究生4人。结论 B19病毒VP1基因变异对其蛋白结构与功能有重要影响,需要重视其基因变异的研究;同时深入揭示VP1u蛋白致心肌病变的机制和是否会影响心脏发育,具有重要的科学意义。
英文主题词Human parvovirus B19;VP1 gene;protein structure;immunization;myocardial pathological changes