中文摘要：

幽门螺杆菌(Hp)感染能够诱导胃上皮细胞发生自噬。自噬作为机体自我保护的生理机制，在抗Hp感染以及其持续性感染中发挥重要作用。若自噬不能有效清除该菌,可导致其在自噬体中生存繁殖而发生持续感染，引起慢性胃炎、消化性溃疡，甚至胃癌的发生。大量证据表明，microRNA能调节自噬发生过程。Hp感染引起的慢性炎症过程中，microRNA表达谱发生表达失衡，miR-30b表达出现升高并抑制Hp感染所致的自噬发生，但目前具体机制尚不清楚。生物信息学分析结果显示Beclin1和Atg12作为自噬发生的关键信号分子，可作为miR-30b的靶蛋白。本项目拟分别在体内、体外，通过上调或下调miR-30b,观察Hp感染引起的胃上皮细胞自噬的变化，以及自噬对该菌的清除情况，以期阐明miR-30b在幽门螺杆菌诱导的胃上皮细胞自噬调节与持续性感染发生的机制,为寻找Hp慢性持续性感染新的治疗手段提供理论依据.

结论摘要：

幽门螺杆菌(H. pylori)感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素，与胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的发病密切相关，WHO已将其列为第一类致癌因子。一般认为，H. pylori是一种胞外致病菌，但越来越多的证据显示该菌能在胃上皮细胞中生存增殖，抗生素和机体免疫反应均不能清除胞内的H. pylori而导致持续性感染引起胃部疾病的发生。深入阐明H. pylori慢性感染机制对揭示其致病机理、发展新的有效的H. pylori感染治疗手段具有重要的理论指导意义。课题组前期研究发现MIR30B不仅在体外感染模型中表达升高，而且在临床活检标本中也观察到MIR30B表达量在H. pylori感染组胃粘膜组织显著高于未感染组。另外， MIR30B能明显抑制自噬信号蛋白LC3的Ⅰ型向Ⅱ型转变，以及抑制GFP-LC3的荧光蛋白聚集，提示MIR30B参与了H. pylori引起的自噬调控。BECN1和ATG12作为自噬信号通路上的两个重要分子,生物信息学分析显示它们可能是MIR30B的靶标蛋白。为此提出如下机制设想MIR30B通过调节自噬通路中的信号蛋白BECN1和ATG12而发挥抑制作用，从而影响到H. pylori被清除，导致H. pylori在自噬体中生存繁殖而发生持续感染，引起慢性胃炎、消化性溃疡等疾病。本研究通过H. pylori感染人胃上皮细胞自噬模型和临床胃粘膜标本的检测，以MIR30B为研究对象，采用实时定量PCR技术对其表达进行鉴定；分别转染MIR30B模拟物及抑制剂上调和下调胞内MIR30B的水平，采用Western-blot、激光共聚焦、电镜等技术观察MIR30B在H. pylori感染中的自噬变化；结合生物信息学和萤光素酶实验等鉴定MIR30B的靶基因--BECN1和ATG12；并进一步通过庆大霉素保护实验和免疫荧光实验研究MIR30B抑制自噬对胞内H. pylori的清除作用。获得以下研究结果1)H. pylori感染能够诱导AGS细胞自噬，抑制自噬可促进H. pylori的胞内存活。2)预测并鉴定了MIR30B的靶基因BECN1和ATG12，MIR30B通过转录水平抑制其靶基因从而扰乱自噬。3)与未感染H. pylori人群相比，感染病人自噬水平降低且与MIR30B呈负相关。4)MIR30B可通过抑制其靶蛋白有利于H. pylori在胞内存活。