中文摘要：

细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体。生物膜赋予了细菌许多新的生物学性状，它通过粘附、定植、抗吞噬、和对环境的高耐受性而突现其在医学中的重要意义，且被膜菌对常用抗生素都不敏感。故寻找控制细菌生物膜的有效措施，已成为当务之急。最近的研究表明，噬菌体能产生多糖解聚酶降解细菌胞外多糖，从而有可能成为破坏细菌生物膜的"酶学消毒剂"。在本室新近完成全基因组测序和注释的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3中，有一个基因的编码产物被推定为多糖水解酶家簇的成员。本研究拟对PaP3多糖水解酶基因进行克隆和表达，继之研究该酶①对细菌胞外多糖的降解活性；②对细菌生物膜结构的消解效力；③抗被膜菌粘附、定植的能力；④削弱被膜菌对药物的耐受性；⑤消除医疗留置导管内被膜菌的能力。从而探讨其作为细菌生物膜酶学消解制剂的应用前景?。

结论摘要：

细菌生物膜是细菌自身分泌的胞外多糖与菌体粘连而成的结构群体。噬菌体产生的多糖解聚酶能降解细菌胞外多糖，从而有可能成为破坏细菌生物膜的"酶学消毒剂"。在本室完成全基因组测序和注释的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3和PaP1中，分别有一个基因的编码产物被推定为多糖水解酶家簇的成员。本研究用PCR扩增法获得了PaP3、PaP1的多糖解聚酶基因，分别克隆于原核表达载体pQE-31中，构建重组表达质粒，并实现了目的蛋白在大肠埃希菌中的表达；经蛋白纯化、复性，获得了具有降解铜绿假单胞菌生物膜活性的噬菌体多糖解聚酶①用挖孔法测得多糖解聚酶表达蛋白对生物膜的胞外多糖具有降解活性；②采用微量倍比稀释法测得多糖解聚酶与庆大霉素、环丙沙星、加替沙星、头孢他啶分别协同作用后，这四种抗生素相应的MIC、MBC都出现了不同程度的降低③采用FITC-ConA/PI荧光对多糖解聚酶处理前后的铜绿假单胞菌PA3生物膜进行双染，结果表明多糖解聚酶能够降解生物膜的胞外多糖。已发表论文1篇，综述2篇；待发表论文5篇（其中2篇拟投送SCI收录外文期刊），综述1篇；参加国际交流会议1次，参加全国会议1次；培养博士生1名，硕士生1名