中文摘要：

肾脏纤维化是慢性肾脏病进展的共同途径，文献报道及我们前期工作显示前列腺素系统COX2-PGE2-EP信号途径可能在慢性肾脏病肾脏纤维化发生中具有重要病理作用。本课题拟在建立前列腺素E2受体不同亚型基因敲除小鼠模型的基础上，通过体外培养的系膜细胞和整体动物水平研究PGE2四种受体亚型（EP 1-EP 4）在肾脏纤维化发生中的作用及机制，比较不同EP受体亚型基因敲除小鼠肾小球系膜细胞在TGF-β刺激后细胞增殖与细胞外基质分泌的变化及EP不同亚型基因敲除小鼠5/6肾切除纤维化模型肾组织病理及纤维化指标的改变，并探讨cAMP/PKA、Ca2+ -内质网应激-PKC信号通路及其下游激酶表达及活性的差异，进一步分析EP受体不同亚型参与调控系膜细胞增殖、细胞外基质积聚及肾纤维化发生的作用机制，从分子细胞和动物整体水平揭示EP受体不同亚型在肾脏纤维化发生发展中的作用及机制，为延缓肾纤维化寻找新的调控靶点。

结论摘要：

目的为了深入研究慢性肾脏病的纤维化发生机制，本研究探讨前列腺素E2受体4种不同亚型在系膜细胞增殖及肾脏纤维化发生中的作用及参与调控的主要机制。方法（1）体外培养EP1～EP4基因敲除、野生型小鼠系膜细胞， TGF-β刺激后观察各组细胞增殖、周期变化、细胞外基质合成、前列腺素系统有关酶的变化及内质网应激、MAPKs信号通路的变化。在上述研究的基础上，将EP1～EP4-siRNA及EP1～EP4腺病毒分别转染至野生型小鼠系膜细胞，并加入选择性EP1～EP4拮抗剂及激动剂，在抑制和过表达EP受体的同时观察TGF-β诱导的系膜细胞上述各项指标变化，探讨EP受体在系膜细胞增殖过程中的作用机制。（2）通过建立EP1～EP4基因敲除小鼠与野生型小鼠肾纤维化模型，观察肾脏病理变化及免疫组化观察肾组织纤维化指标,在整体水平进一步明确EP受体在肾脏病进展过程中的作用。结果1. EP1、EP3受体可促进小鼠系膜细胞增殖、细胞外基质积聚及前列腺素合酶的表达，其发生机制可能与增加PGE2的活性、MAPKs磷酸化水平及过度内质网应激有关；抑制EP1及EP3受体表达可减轻TGF-β1诱导的系膜细胞损伤。EP1、EP3受体基因敲除后可以使5/6肾切除模型肾功能改善，同时病理损伤减轻；肾组织纤维化指标及有关内质网应激指标表达水平下降。2.特异性激活EP2受体表达可抑制小鼠系膜细胞增殖、细胞外基质积聚及前列腺素合酶的表达，其发生机制可能与增加cAMP的活性，从而抑制MAPKs磷酸化水平及过度内质网应激有关； EP2基因敲除后使5/6肾切除模型肾功能损伤指标血清尿素氮、肌酐明显上升，病理改变加重；肾组织纤维化指标及内质网应激指标蛋白表达水平增加。3.EP4受体可能促进小鼠系膜细胞增殖，其发生机制可能与诱发过度内质网应激发生及激活cAMP/PKA活性，最终引MAPKs激酶活性变化有关。EP4基因敲除后可以使5/6肾切除模型肾功能损伤指标减轻，同时病理改变减轻；肾组织纤维化指标表达水平减少，可减轻5/6肾切除小鼠肾小球损伤。结论EP1 、EP3可能参与了肾纤维化的病理过程，对EP1 、EP3、EP4受体的干预或应用其拮抗剂可延缓肾脏纤维化。EP2表达增加可减轻TGF-β1诱导的系膜细胞损伤，激动EP2受体可能对肾纤维化有保护作用，其激动剂的使用可作为治疗肾脏病的新靶点。