甘露聚糖酶可以降解植物性饲料原料中的抗营养因子,提高饲料转化效率。目前其生产存在酶产率低,生产成本高等问题。本课题应用极端微生物菌种选育技术,通过由矿温泉中分离的嗜酸耐热菌的复筛,诱变,定向筛选,驯化,稳定; 和构建毕赤酵母工程菌株的办法,通过基因Man-A的克隆和优化改造,Man-A表达载体的构建和扩增,酵母的转化及筛选,研制表达饲用酸性β-甘露聚糖酶的工程菌株,制备高比活耐热嗜酸β-甘露聚糖酶;研究高细胞密度发酵工艺技术;将甘露聚糖酶的发酵水平提高3-5倍,即从现在的150U/ml 提高到500-700U/ml;进行动物试验,验证饲喂效果, 提高畜牧生产效率。
甘露聚糖酶可以降解植物性饲料原料中的抗营养因子,能够提高饲料转化效率,促进动物生长,预防肠道疾病,保护环境等。目前甘露聚糖酶的生产存在酶产率低,生产成本高等问题。本课题应用微生物菌种选育和基因工程技术,筛选到多株分泌甘露聚糖酶的枯草芽孢杆菌、黑曲霉等;应用同源引物,克隆了不同来源的甘露聚糖酶基因man, 并对man2进行密码子的优化改造。构建了四株毕赤酵母工程菌株,筛选到产高比活β-甘露聚糖酶工程菌株,甘露聚糖酶活力达1102IU/mL。总结重组毕赤酵母工程菌株高细胞密度发酵工艺生产技术参数一套。进行动物试验,验证了重组表达的甘露聚糖酶具有良好的饲喂效果。本课题为甘露聚糖酶的工业化生产提供了核心技术,解决了酶制剂开发中表达产量低的难题。课题鉴定成果1项;申请国家发明专利2项,已授权1项;发表论文7篇,大会报告4篇;培养研究生3名。