中文摘要：

肿瘤产生的各种免疫抑制机制是肿瘤免疫治疗的主要瓶颈，在肿瘤免疫抑制微环境中，T细胞会失去活性，甚至凋亡。 通过对T细胞活化的信号通路进行分析，我们认为AKT的激活是T细胞活化的关键。 本课题提出向肿瘤特异性T细胞中转入持续活化的AKT将使其在肿瘤微环境中保持活性，从而大大提高过继性T细胞治疗的效果。 对于过继性输入的T细胞，我们将通过基因改造使其靶向肿瘤干细胞。 肿瘤干细胞对肿瘤的增殖和扩散起着至关重要的作用，但肿瘤干细胞靶向的过继性T细胞治疗的研究仍然缺乏。 本课题选择肿瘤干细胞表面抗原EpCAM为靶标，向T细胞中转入EpCAM特异性嵌合型T细胞受体基因，利用SCID-bg免疫缺陷型鼠的人结肠癌模型研究其对肿瘤的抑制作用。 我们预期，表达持续活化的AKT并靶向EpCAM的过继性T细胞治疗将突破肿瘤免疫治疗的瓶颈，具有广阔的临床应用前景。

结论摘要：

本项目围绕肿瘤的过继性T细胞治疗，通过使T细胞靶向肿瘤干细胞以及抵抗肿瘤免疫抑制，探索如何提高肿瘤免疫治疗的疗效。过继性T细胞治疗是肿瘤免疫治疗的重要手段，而对T细胞靶标的选择影响过继性T细胞治疗的效果。 根据肿瘤干细胞在肿瘤生长和转移中的重要作用，在本研究中，我们探索靶向肿瘤干细胞的过继性T细胞治疗是否能取得显著的抗肿瘤效果。 我们选取了肿瘤干细胞抗原EpCAM作为靶标，构建了EpCAM特异性嵌合型抗原受体基因，并利用逆转录病毒将其导入人外周血淋巴细胞。 我们利用人前列腺癌PC3和PC3M检验转导后T细胞的疗效。 PC3M作为PC3肿瘤细胞中具有高转移能力的克隆，其EpCAM表达水平高于PC3。 靶向EpCAM的T细胞在体内和体外实验中显著杀伤PC3M。 更重要的是，在PC3模型中， 我们发现尽管EpCAM在PC3肿瘤中的表达水平很低，靶向EpCAM仍然能显著抑制肿瘤生长和转移，并延长小鼠生存期。 肿瘤的免疫抑制微环境是肿瘤免疫治疗的主要瓶颈。 肿瘤利用各种免疫抑制机制逃避免疫攻击，随着对这些免疫抑制机制的了解，人们开始利用一些手段阻断免疫抑制信号以提高免疫治疗的疗效。 但是因为免疫抑制微环境的复杂性，仅仅阻断部分免疫抑制通路并不能收到很好的效果。 在本研究中，我们从另一个角度出发，通过改造T细胞，使T细胞能够抵抗各种已知或未知的免疫抑制机制。 我们利用逆转录病毒向肿瘤特异性T细胞中转入Akt，分别利用小鼠黑色素瘤B16-OVA以及人前列腺癌PC3M肿瘤模型，验证了提高肿瘤特异性T细胞Akt活性能够增加过继性T细胞治疗的疗效。 在B16-OVA模型中，我们向识别OVA抗原的OT-1细胞转入Akt, 发现转入Akt的OT-1细胞与B16-OVA共培养时增殖和细胞因子的生成都得到上调。 将转入Akt的OT-1细胞输入B16-OVA荷瘤鼠可显著抑制肿瘤生长并延长小鼠生存期。 在PC3M肿瘤模型中，我们利用逆转录病毒向人外周血淋巴细胞中转入EpCAM特异性嵌合型抗原受体和Akt的双顺反子逆转录基因，发现提高Akt活性能减轻PC3M肿瘤对T细胞增殖的抑制，并减少T细胞凋亡。 在体内实验中，高表达Akt的T细胞能显著抑制PC3M肿瘤在NOD/SCID鼠的生长。 我们的研究为提高过继性T细胞治疗的疗效提供了新的思路，并为临床转化奠定基础。