构建苎麻花叶病毒cDNA文库;测定出全长cDNA序列;克隆出苎麻花叶病毒CP基因;运用RNA介导植物抗病毒策略,PCR点突变改造CP基因;以去除了选择标记基因的PBI121基本载体,构建CP基因和改造后的CP基因的植物表达载体;农杆菌介导转化高产优质苎麻品种(系),获得转基因植株;用病毒分离物接种鉴定筛选出抗病株系。为培育抗病、高产、优质苎麻新品种提供材料,为苎麻花叶病毒的分子生物学研究打下基础。
苎麻是中国特有的以纺织为主要用途的农作物,是一种优良的纺织原料,被公认为"天然纤维之王"。 苎麻花叶病是我国苎麻生产的一种主要病害,但对于其病原的研究却严重滞后,这给苎麻的抗病毒育种带来很大的障碍。本项目探索利用分子生物学方法来划分苎麻花叶病毒的分类地位、克隆其外壳蛋白基因、采用RNA介导植物抗病毒策略,获得抗苎麻花叶病毒的转CP基因苎麻优良株系。我们通过观察苎麻花叶病病毒粒子形态、分离物SDS-PAGE电泳条带大小、核酸分子量大小以及病毒传播方式等特征,初步判定该病毒为长线形病毒科成员;构建了苎麻花叶病毒cDNA文库,为苎麻花叶病毒基因组序列测定和基因组结构研究打下基础;克隆了苎麻花叶病毒外壳蛋白基因;采用PCR点突变技术对已克隆的CP基因进行改造,使改造后的CP基因在转化植株的表达中只转录不翻译;以农杆菌介导的叶盘法将目的基因转化高产优质苎麻品种"湘苎2号";通过PCR和Southern blot检测转化效率及插入拷贝数;用病毒分离物接种转基因植株,筛选出抗病转基因植株,获得两株高抗苎麻植株,结果表明转化植株的抗病能力显著高于对照。这对于苎麻的抗花叶病育种具有重要意义。