中文摘要：

卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）感染与卡波济肉瘤（KS）发生密切相关，HIV-1与KSHV共感染导致AIDS-KS频繁发生。AIDS-KS预后差，往往在两年内死亡。KSHV编码卡波济蛋白A（Kaposin A）能够转化细胞并诱生肿瘤；我们前期的研究表明，HIV-1 Tat通过调控JAK/Stat信号通路诱导KSHV复制（J Virol, 2007, 81:2401）。那么，Tat是否有可能通过调控关键信号通路来增强Kaposin A致瘤，参与AIDS-KS的发生？为了验证此设想，本项目拟通过鸡胚绒毛膜尿囊膜和裸鼠实验研究证实Tat能够增强KSHV Kaposin A致瘤；运用cDNA芯片、RNA干扰、慢病毒载体介导的蛋白激酶的显性负相结构等技术，鉴定调控Tat增强Kaposin A致瘤的关键信号通路。本研究有助于阐明AIDS-KS发病的分子机制，为AIDS-KS治疗提供有效分子靶点。

结论摘要：

本项目研究中，我们运用分子克隆、基因转染、RT-PCR和Western blot等技术鉴定并获得了稳定表达KSHV Kaposin A、HIV-1 Tat、Kaposin A + Tat蛋白的单个细胞克隆。软琼脂集落、3H-TdR掺入和流式细胞术检测结果表明，Tat蛋白在体外可以增强Kaposin A诱导细胞增殖。动物试验的结果显示，Tat能够在裸鼠体内增强Kaposin A诱导肿瘤形成。cDNA芯片技术并配合显性负相质粒（dominant-negative construct，DN）过表达试验证明，Tat是通过调控MEK/ERK MAPK、PI3K/Akt和JAK2/STAT3多个信号通路加速Kaposin A在裸鼠体内诱导肿瘤的生成。 进一步，采用慢病毒载体介导Tat和KSHV的另一致瘤基因vIL-6感染内皮细胞，运用MTT、CCK-8、软琼脂培养、平板克隆、流式细胞术及微管形成等实验进行细胞增殖、克隆形成、细胞周期和微管形成进行分析。运用鸡胚绒毛尿囊膜（chick chorioallantoic membrane，CAM）和裸鼠模型体内观察Tat对vIL-6诱导血管生成和肿瘤形成的影响。结果表明，Tat不仅可以促进vIL-6在体外诱导细胞增殖、克隆形成、细胞从G0/G1向S期转换和微管形成，而且能够增强vIL-6在CAM和裸鼠模型上诱导血管生成和肿瘤形成。机制方面的研究表明，Tat并不影响vIL-6的表达，而是通过促进vIL-6活化PI3K/AKT、抑制PTEN/GSK-3β信号通路参与了血管生成和肿瘤形成；过表达PTEN和GSK-3β、抑制PI3K和AKT的磷酸化均能明显抑制Tat增强vIL-6诱导的血管生成和肿瘤形成。提示，Tat通过调控PTEN/PI3K/AKT/GSK-3β信号通路促进vIL-6诱导血管生成和肿瘤形成。IHC染色结果显示，Tat增强vIL-6诱导血管生成和肿瘤形成的同时也促进了VEGF、b-FGF和Cylin D1的表达。 总之，完成该项目后在SCI收录期刊上共发表研究论文6篇，累计影响因子超过25。项目实施期间共培养3位博士研究生和5名硕士研究生。另外，仍有1名博士后在站和1名博士研究生在读。