中文摘要：

邻苯二甲酸酯(phthalic acid esters,PAEs)是一类全球性有毒难降解有机污染物，美国国家环保局和中国环境监测总站列其为优先控制污染物。我室近年来从事三峡库区环境中PAEs的含量、毒性及生物降解研究，研究结果表明，三峡库区PAEs污染治理已成为当务之急。我室近期从重庆市污水处理厂的活性污泥和塑料厂排污出口处土壤中分离到两株邻苯二甲酸酯降解菌CQ0110Y及CQ0110G并进行了一些前期研究（见研究基础）。本课题拟构建两降解菌株的基因组文库，通过特定的筛选方法（利用降解活性）寻找包含降解基因的阳性克隆；对降解基因进行序列测定，分析其开放阅读框并在基因库中分析比较；通过RT-PCR技术进一步验证降解基因在阳性克隆中的表达并和原始降解菌株进行降解性能的比较，以便为分析两菌株降解PAEs分子机理提供依据，并为今后构建具有更高PAEs降解效率的降解工程菌以应用于污水处理做准备。

结论摘要：

邻苯二甲酸酯(phthalic acid esters,PAEs)是一类全球性有毒难降解有机污染物，美国国家环保局和中国环境监测总站列其为优先控制污染物。本课题立足于本单位从污染环境中分离到的邻苯二甲酸酯降解菌完成了以下工作（1）采用16srRNA技术进一步鉴定了细菌种属，两降解菌分别属于微杆菌和赤红球菌。（2）通过超声破碎细菌基因组DNA，回收3-10kb范围的DNA片段，采用stratagene公司的基因组文库构建试剂盒构建了降解细菌的基因组文库，该文库的效价达到了2500000 PFU/ML，文库质量较好。（3）采用邻苯二甲酸酯琼脂平板特异性选择筛选获得一株高效的阳性克隆菌株，取名为phtY。通过质粒提取与酶切验证，该质粒为重组体质粒。（4）设计PCR引物对目的DNA进行扩增、测序，该序列在GENBNAK中的登记号为EF449771，开放阅读框（ORF）的分析显示目的片段中含有一个2895bp的ORF，分析是相应的降解基因。（5）通过RT-PCR 技术进一步验证了降解基因来源于原始降解菌并能表达。本研究结果为邻苯二甲酸酯类物质的环境污染治理打下了一定的基础。