中文摘要：

研究显示EGFR二次突变导致磷酸化调控紊乱及上皮间质转化（EMT）可能是表皮生长因子受体激酶抑制剂（EGFR-TKI）吉非替尼耐药的重要因素。磷酸酶Shp2是EGFR下游可逆磷酸化调控的关键分子，研究显示Shp2参与非小细胞肺癌对吉非替尼的耐药。本课题预实验揭示Shp2与肺上皮细胞EMT密切相关，提示Shp2可能是EMT参与EGFR-TKI耐药的关键调控分子。本课题将通过细胞模型结合肺上皮Shp2敲除动物模型明确磷酸酶Shp2参与EMT介导NSCLC吉非替尼耐药性的作用方式，包括参与EGFR下游ERK/MAPK磷酸化调控及细胞形态改变与EMT进程；调控TGFβ1诱导肺癌EMT的产生；参与EGFR核转运及核EGFR对耐药性的影响；同时结合临床筛选与原发及获得性耐药相关的Shp2突变位点。本课题预期将明确肺癌EGFR-TKI靶向治疗药物耐药的磷酸酶调控方式，为后续转化研究奠定重要理论基础。

结论摘要：

肺癌是国内发生率与死亡率首位的恶性肿瘤，对治疗药物产生耐药使得肺癌的预后差，生存率低，而肿瘤细胞的上皮间质转化可能是产生耐药的一个原因。原癌蛋白SHP2是一个普遍表达的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶，在多种肿瘤，包括肺癌中存在突变和高表达现象。SHP2是否参与上皮间质转化尚无研究。非小细胞肺癌细胞株A549在TGFβ1诱导下产生经典的上皮间质转化，表现为细胞的形态发生改变，迁移能力增加，上皮标志物表达下降，间质标志物表达升高。在EMT过程中，SHP2的表达没有发生改变，降低SHP2的表达可以显著地抑制EMT。SHP2的活化突变，失活突变以及抑制剂研究表明需要SHP2的磷酸酶活性参与正向调控TGFβ1诱导的A549细胞的EMT。为了进一步研究SHP2参与EMT的分子机制，利用酵母双杂交的方法发现SHP2催化结构域的一个新的结合蛋白Hook1。Hook1与SHP2的N端SH2结构域和催化结构域都发生相互作用，并且发现与SHP2的作用相反，Hook1负向调控TGFβ1诱导的EMT。TGFβ1处理细胞，降低Hook1的表达，而SHP2的催化活性升高。这些结果暗示Hook1是一个SHP2的内源抑制剂。SHP2与Hook1形成一个复合物，共同调控TGFβ1诱导的EMT。通过干预SHP2与Hook1的复合物可以抑制肿瘤细胞的EMT，进而阻止肿瘤的转移与耐药。