中文摘要：

本项目以东北林蛙（R.dybowskii）为试验对象，用不同微生物（E.coli、S.aureus和RGV）胁迫，采用RT-PCR、Real-time PCR 、RP-HPLC、2D电泳和ESI-MS/MS技术，研究胁迫后其皮肤cDNA及分泌物中抗菌肽和蛋白质不同时段的表达变化。cDNA测序获得新的抗菌肽完整序列，并检测了5条基因在RGV胁迫后时空表达的变化；通过蛋白和多肽研究，分离纯化其皮肤分泌物中抗菌肽的组分并检测其生物活性，获得微生物胁迫后不同时间段的抗菌肽表达谱，通过对皮肤分泌物中抑菌活性强的组分进行质谱和N端测序，发现4条新抗菌肽。表达稳定的组分显示其强抑菌活性，而差异表达的组分抑菌活性不明显；2D电泳分离出7种蛋白分别是代谢蛋白、信号转导和免疫蛋白。利用载体pPIC9K构建抗菌肽真核表达体系，活性检测结果显示重组抗菌肽有良好的抗微生物活性。本研究利用膜片钳技术和RGV胁迫下皮肤TLR mRNA特异表达变化探讨了抗菌肽在分子及蛋白水平上选择性表达的特征，为理解先天免疫的组成方式、机制、进化规律提供了思路。