中文摘要：

本课题拟将EBV潜伏期基因LMP1、EBNA2和早期基因BARF1和BHRF1特异性寡核苷酸片段插入带有RNA聚合酶Ⅲ依赖性启动子（H1-RNA）的质粒载体，构建能转录产生针对相应靶基因的siRNA转录载体。用siRNA转录载体转染EBV阳性肿瘤细胞系，以EBV阴性肿瘤细胞系作为细胞对照，非相关基因的siRNA作为实验对照。在mRNA和蛋白水平检测细胞中靶基因的表达，观察siRNA对靶基因的封闭效果以及对肿瘤细胞凋亡和增殖的影响。同时将siRNA转录载体注入以EBV阳性肿瘤细胞建立的荷瘤小鼠体内，观察siRNA干涉对肿瘤生长的抑制作用；或将以siRNA转录载体转染的EBV阳性肿瘤细胞接种裸鼠或SCID小鼠，观察siRNA干涉对异体接种致瘤的影响。从细胞水平、分子水平和机体水平分析肿瘤细胞凋亡的规律，深入探讨靶基因在EBV相关肿瘤中的作用，为病毒相关肿瘤的治疗提供特异性的新技术和新方法。

结论摘要：

EBV与多种人类恶性肿瘤的发生有关，其潜伏期基因LMP1和EBNA2等是公认的病毒癌基因，由于EBV几乎存在于EBV阳性癌组织的所有癌细胞中，因此理论上可以通过抑制病毒癌基因的表达诱发EBV阳性肿瘤细胞凋亡达到治疗肿瘤的目的。本研究选择EBV阳性胃上皮细胞GT38作为靶细胞，以潜伏期基因LMP1和EBNA2为靶基因，成功获得了高滴度靶向上述病毒基因的重组逆转录病毒V-retroLMP1和V-retroEBNA2以及稳定产毒的PA317细胞系。用重组逆转录病毒V-retro LMP1和V-retroEBNA2感染GT38细胞，经G418筛选获得了靶基因稳定沉默的细胞克隆。实验结果表明EBNA2基因沉默对GT38细胞的生物学表型无明显影响。LMP1基因沉默可抑制GT38细胞增殖，诱发细胞凋亡，细胞周期呈现G1期阻滞；其异种动物接种致瘤能力减弱；LMP1基因沉默可下调Bcl2的转录表达；并通过抑制NFκB和Ap-1核转录因子信号转导途径影响其下游与肿瘤浸润、增殖和凋亡等相关因子的表达。为深入探讨病毒癌基因在EBV相关肿瘤发生中的作用机制，以及开展EBV相关肿瘤的特异性治疗提供了实验基础。