中文摘要：

本课题旨在制备分散性好、稳定的的磁性纳米金-酶双标记抗生素抗体蛋白的免疫检测探针，建立灵敏快速的磁性纳米金-酶双标记免疫层析检测技术的基础上，采用电子显微技术、衍射技术、光谱学技术等表征金磁复合纳米粒子及其标记探针的结构、分散性及形貌，研究其磁响应性和光学特性，从生物大分子与小分子相互作用理论、表面化学理论来探讨金/磁性复合纳米溶胶与辣根过氧化物酶、抗生素抗体蛋白等生物分子的结合机理，从结构化学上阐明金/磁性复合纳米颗粒、酶双标记抗体蛋白对抗体抗原免疫反应表位的影响，并对建立的金磁微粒标-酶双标记免疫检测体系进行方法学评价，开展其在食品中抗生素检测中的应用评价研究。本研究可为食品安全提供一种简便、灵敏、快速定性定量的检测新技术，相关研究未见报道。本研究对于揭示复合纳米颗粒与生物大分子的结合机理，探索复合纳米颗粒与生物体系作用的新形式有着重要的科学价值。

结论摘要：

金磁复合微粒Fe3O4/Au具备良好的磁学性能和生物相容性，在生物医学、环境监测和食品安全检测领域得到了广泛的关注。本文研究了Fe3O4-PEI复合微粒和两种Fe3O4/Au复合微粒的制备，对其进行了表征，并将其作为磁分离酶联免疫检测体系的载体，应用于抗生素如氯霉素残留的检测。具体研究内容如下 1、氨基化磁性复合微粒Fe3O4-PEI的制备 采用一锅法制备氨基化的磁性复合微粒Fe3O4-PEI，此复合微粒为球形，粒径均一，具有良好的分散性和晶体结构，得到了100 nm-400nm范围内的Fe3O4-PEI复合微粒。选择粒径约为150 nm的样品用于金磁复合微粒制备。 2、金磁复合微粒的制备 在粒径约为150 nm的Fe3O4-PEI复合微粒表面包被胶体金制备两种金磁复合微粒。经过比较发现，多层复合型比组装型具有更高的胶体金包被率；粒径约为180 nm；光学性能良好，在 560 nm附近有明显的特征吸收峰；磁饱和度约为40.4 emu/g，比Fe3O4-PEI复合微粒降低了33.3 %。因此将多层复合型金磁微粒用于免疫磁珠的制备。 3、免疫磁珠和酶标氯霉素的制备 将多层复合型Fe3O4/Au微粒与氯霉素抗体结合得到免疫磁珠，偶联反应在25 min后基本结束，最佳pH为8.0，最佳抗体使用量为1200 ？g，且得到抗体的平均包被率约为27.27%。采用高碘酸钠氧化法制备了酶标记氯霉素抗原(HRP-CAP)，结果显示其浓度为0.413 mg/mL，酶活损失为8.55 %，偶联率为6.65。 4、磁分离酶联免疫检测体系的建立及在抗生素素检测中的应用探讨按照最佳制备条件得到免疫磁珠和酶标氯霉素后，将它们与氯霉素标准溶液竞争结合建立磁分离酶联免疫检测体系，探讨了其在牛奶中氯霉素含量检测的可行性。研究结果显示氯霉素含量在1 ng/mL-10 ng/mL范围内，氯霉素浓度与百分吸光度值有较好的线性关系，其回归方程为y= -8.2501x+92.020（R2=0.9843），IC50为5.1 ng/mL。该检测体系对甲砜霉素和氟甲砜霉素的交叉反应率分别为1.3 %和2.1 %，具有较好的特异性。将其应用于牛奶样品中的氯霉素检测，回收率在84.70 %-87.55 %之间。