启动子(promoter)通常紧邻于转录起始为点(TSS)的上游100-300bp,是一类非常重要的顺式作用原件,与其他反式作用因子协同作用调控基因转录起始,是基因调控网络的基本成员之一。目前,哺乳动物RNA聚合酶II核心启动子研究领域已取得了巨大进展,但针对高等植物特别是水稻的RNA聚合酶II核心启动子仅限于预测阶段,还无可靠的实验数据。本研究拟通过水稻RNA聚合酶II抗体的染色体免疫共沉淀(ChIP)方法,获取不同发育时期活跃的启动子单元,再用SOLiD测序技术获取活跃的启动子DNA序列(ChIP-Seq方法),构建水稻RNA聚合酶II核心启动子数据库,分析水稻启动子结构特征,比较不同发育阶段的活跃转录基因,理解水稻的生长发育机理。
启动子是结合转录因子并引发转录启动的一段DNA序列单元,与转录因子相互作用负责基因的转录启动调控。水稻是重要的粮食作物,同时也是遗传学研究的模式材料,广泛应用于植物家养化过程及基因组进化规律等研究。精确识别水稻启动子,对注释水稻基因组、理解水稻的转录调控及生长发育调控有重要作用,我们利用染色体免疫共沉淀技术结合二代高通量测序技术,对胚、露白(水泡5天)及二叶期(水培养13天)三个阶段水稻材料固定染色体,制备DNA片段,用水稻特异的组蛋白H3K4me3抗体免疫共沉淀水稻基因组DNA片段,高通量测序获得ChIP后DNA序列,比对基因组确定ChIP DNA的位置分布,分析其上下游基因及启动子结构特征,在水稻胚、露白及二叶期阶段,活跃的启动子结构主要为GGC/CCG,CT等motif;预测未注释基因组区域新的基因结构;比较了三个生长阶段水稻组蛋白H3K4me3差异及结合区域基因的差异,发现水稻胚阶段有599个特异基因,水稻露白阶段有343个特异基因,水稻苗阶段有391个特异基因,这些活性基因的功能与其发育阶段紧密相关。同时整合GenBank中已发表的水稻H3K4me3 ChIP-seq数据,鉴定水稻基因组H3K4me3结合的DNA区域,构建了水稻基因组活跃核心启动子数据库。