中文摘要：

'蛋白质内含子'（Intein）在蛋白工程中被广泛应用，但其机理研究较少；另一方面，Intein为结核菌生长所必须，因而被认为新型是药物设计靶点。本项目以二维、三维核磁共振(NMR)为主要手段，研究Intein的溶液性质与蛋白剪接机理。运用分子生物学手段，制备了13C 15N 同位素标记的Intein蛋白质以及多种突变体，通过NMR解析蛋白质结构，运用NMR技术结合蛋白质突变研究特定氨基酸残基的溶液性质，通过pH 滴定检测蛋白质活性中心的组氨酸和天冬氨酸侧链的pKa、氨基酸的氢键状态，通过R1、R2、NOE等实验研究关键氨基酸突变对蛋白质动力学性质的影响，从而阐明Intein的剪接机理。在Intein结构与机理研究的基础上，我们采用NMR技术、结合ITC等手段研究金属离子与Intein 的作用，掌握金属性质、配位方式以及热力学参数对金属离子对Intein 抑制作用的关系，得到了在体外、体内均具有Intein活性抑制作用的铂配合物，这一配合物通过抑制Intein剪接抑制结核菌的生长。同时，进一步从反应动力学、配位结构等方面研究了铂配合物与Intein蛋白质的相互作用，以阐明抑制剂机理。