中文摘要：

精原干细胞具有永生化和多能化潜能，是精子形成的前体细胞，在睾丸等微环境中具有增殖、分化能力。精原干细胞体外诱导分化和移植技术为男性不育症的治疗提供了一种崭新的方法，尤其对接受大剂量放疗/化疗后导致的男性不育具有独特的临床价值。我们在前期性腺器官冷冻保存的基础上，拟通过对大鼠精原干细胞的分离、纯化和体外诱导培养，利用冷冻保存和显微注射移植技术，期望使移植的精原干细胞在受者体内恢复生精功能，从而为男性不育的治疗提供一种新的技术，并为该技术推向临床应用提供理论和技术支持。本研究内容包括（1）建立有效的精原干细胞获取方法；（2）体外诱导精原干细胞增殖、分化；（3）优化精原干细胞冷冻保存方法；（4）建立成熟的精原干细胞移植技术；（5）建立放疗/化疗后的动物模型并检测其生精功能；（6）动态观察精原干细胞增殖和分化过程，探索精子发生机制。

结论摘要：

随着现代医学的发展，青春期前肿瘤患者的临床治愈率显著增加，生存率显著提高，但他们中许多要长期面对因接受大剂量化疗所引起的不育问题，目前医学对这类医源性不育尚没有治疗的方法。精原干细胞具有永生化和多能化潜能，是精子形成的前体细胞，在睾丸微环境中具有增殖和分化的能力。精原干细胞移植为男性不育症的治疗开启了一扇新的大门。本实验中我们探讨精原干细胞的表面标志物及其分离纯化方法，观测精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化过程，及其分化形成成熟精子的能力，为大剂量化疗所致不育的患者通过精原干细胞移植的方法来治疗提供实验依据。本研究发现α6-Integrin 与c-kit 可作为特定时期精原细胞的表面标志，用于精原细胞的鉴定。采用复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll 密度梯度离心的方法纯化精原细胞，能获得纯度和活性较高的精原细胞。本研究发现将精原干细胞进行同系、同种异体及异种移植后均能在受体生精上皮中克隆增殖，并能分化形成成熟的精子。采用常规方式冷冻保存的精原干细胞，移植后不影响其克隆增殖和分化形成精子的能力，这对临床应用精原干细胞移植技术具有重要的实用意义。