中文摘要：

大肠癌术后放疗后复发是非常棘手的难题，临床主要是以直肠癌复发为主，治疗包括再手术切除和同步放化疗，但是由于适合再手术切除的比例较低，大部分患者需要借助同步放化疗达到姑息治疗目的，但是由于术后放疗后复发再行外照射剂量提升非常困难、疗效不理想，而且并发症发生率较高。利用图像引导放射性粒子植入治疗复发直肠癌具有微创、局部剂量高，周围正常组织损伤小的优势，临床应用显示了很好的前景。65%-75%晚期大肠癌患者过表达EGFR，EGFR抑制剂联合化疗治疗化疗抗拒或未治疗过的转移性大肠癌具有明显提高生存的优势，而EGFR抗体联合持续低剂量率照射治疗大肠癌的基础研究国内外尚没有报道。本文从体内、体外基础研究阐明靶向治疗联合放射性粒子照射对大肠癌细胞的抑制作用，并从分子生物学水平对其作用作用机制进行研究，探寻复发大肠癌治疗的新靶点和靶向综合治疗的新途径，为临床应用提供理论基础。

结论摘要：

研究C225联合外照射对结直肠癌CLl87细胞生物学效应的影响，探讨相关分子机制。比较单纯照射组和C225联合照射组细胞死亡率差异、细胞增殖能力差异、检测细胞周期和细胞凋亡、蛋白免疫印迹法分析两组细胞DNAPKcs、Ku70和Ku80蛋白表达量的变化。联合照射组较单纯照射组死亡细胞比例增加，克隆形成能力下降。C225增强了射线对细胞的杀伤作用，放射增敏比SER为1.38。联合照射组G0／G1期细胞阻滞增加，细胞凋亡比例增加，DNA修复相关蛋白DNAPKcs、Ku70和Ku80蛋白表达量减少。西妥昔单抗增强照射对结直肠癌CLl87细胞的杀伤作用，可能是通过影响细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤修复基因实现的。研究单次、分次和125I粒子照射对结直肠癌CLl87细胞生物学效应的影响。细胞照射后比较细胞总数和细胞存活率差异、比较细胞增殖能力差异。流式细胞仪检测细胞凋亡。蛋白免疫印迹法分析PHLPP2、PTEN和Bax蛋白表达的变化。与单次组和分次组相比，125I组细胞总数减少、存活细胞比例减少，细胞克隆形成能力下降，相对生物学效应是1.41。凋亡检测发现125I组细胞凋亡比例增加。蛋白免疫印迹法检测发现125I组Bax表达量升高，PHLPP2和PTEN的表达量3组间差异无统计学意义。单次、分次和125I照射后细胞PHLPP2蛋白表达水平均升高，但剂量率的高低并不影响其表达水平。不同方式照射后，凋亡相关蛋白Bax的表达水平上升，125I组升高更加明显，125I粒子照射可能通过影响凋亡相关蛋白Bax的表达水平实现对结直肠癌CLl87细胞的杀伤作用。探讨C225对125I粒子照射下结直肠癌CLl87细胞DNA损伤修复和信号传导通路的影响。照射后检测各组细胞中H2AX聚集点数量及阳性细胞比例。蛋白免疫印迹法检测DNA修复蛋白的变化。与125I粒子射组细胞相比，C225联合125I照射组细胞内残余的H2AX聚集点数量和H2AX聚集点阳性的细胞比例均高，且细胞中DNA修复蛋白Ku70和DNAPKcs的含量偏低。蛋白免疫印迹法结果显示，在125I粒子照射过程中，C225能够降低细胞内EGFR的水平，抑制Akt的活化。在125I粒子照射下，C225可以降低细胞内Ku70和DNAPKcs的含量，并抑制Akt活化，减弱CLl87细胞的DNA损伤修复能力。