通过在一个PCR反应体系里提供两对或两对以上引物、能够同时扩增出多个核酸片段的PCR技术称为多重PCR技术。由于多重PCR既具有常规PCR的敏感性和稳定性,又具有一定的通量能力,因此被广泛应用于科研、临床诊断等领域。然而,受体系中的引物二聚体、非特异扩增、不均一的起始模板浓度等的影响,建立稳定的多重PCR扩增体系异常困难。目前常用方法是通过大量的实验不断试错来优化多重PCR反应体系,不但耗时、耗力,而且难以保证成功率。为此,本课题提出建立多重PCR体系的计算机仿真系统,即1) 预测反应中存在的各种状态,如发卡结构、引物与模板的不完全匹配、非特异扩增等;2)建立多重PCR的多状态偶联平衡模型,构建多状态方程;3)依据仿真系统,在定量水平动态地模拟多重PCR的扩增状态,从而实现在理论上对多重PCR体系的优化并进行实验验证,最终提高多重PCR实验的成功率,对于提高临床分子诊断效率具有重要价值。
英文主题词Multiplex PCR;Simulation;MFEprimer;ThermoMatch;SimuPCR