中文摘要：

肝癌细胞获得抵抗失巢凋亡的能力是其发生转移的前提条件，本项目组在对肝癌细胞的失巢研究中，发现在聚集成团的肝癌细胞内部发生Entosis过程，同型的肝癌细胞发生了相互吞噬。我们对获得抵抗失巢凋亡能力的，含有Entosis的肝癌细胞进行了基因芯片的检测和分析，初步获得了一系列有研究价值，可能在Entosis过程中发挥关键作用的基因，初筛结果显示AICL基因在肝癌细胞Entosis的过程中有显著性的升高。为了进一步明确AICL分子是否为肝癌细胞Entosis过程的关键分子。我们拟用免疫共沉淀和质谱寻找与AICL相互作用的蛋白；利用siRNA，抗体封闭，强制性高表达等方法调控其表达；多角度验证AICL的调控对肝癌细胞Entosis发生率和转移的影响。进一步揭示肝癌细胞Entosis发生过程的分子机制，为临床判断肝癌是否容易发生转移以及肝癌转移的靶向性治疗奠定基础。

结论摘要：

肝癌细胞发生转移与其抵抗失巢凋亡，逃避免疫监视密切相关，而HLA-I类分子的下调是肿瘤细胞逃避免疫监视的重要原因。为了检测肝癌细胞抵抗失巢凋亡时变形能力的改变，我们利用polyHEMA建立使细胞悬浮生长的模型，在对肝癌细胞的失巢研究中，发现在聚集成团的肝癌细胞内部发生Entosis过程，本项目组对获得抵抗失巢凋亡能力的，含有Entosis的肝癌细胞进行了基因芯片的检测和分析，初步获得了一系列在转移过程中发挥关键作用的基因，结果显示以AICL，LILRs，KIRs等天然免疫分子在肝癌细胞Entosis的过程中有显著性的升高。为了研究它们在entosis肝癌细胞中的分子机制，我们进行了以下几个方面的研究并获得重要结果①筛选了这些天然免疫分子的结合HLA-I类分子的能力。构建了带有Flag和EGFP标记蛋白的真核表达载体并监控其表达，用HLA的四聚体对AICL，KIR，LILR等天然免疫分子进行筛选，首次发现HLA-I类分子的自由重链可以结合的LILRB5。与以往发现的HLA-B27相互结合的分子LILRs不同，LILRB5与HLA-I类分子特异性结合的分子结构基础可能位于D1和D2结构域。②利用激光共聚焦技术对天然免疫分子进行了细胞定位，发现与LILRB2不同，LILRB5只表达在细胞浆中，AICL蛋白则既表达在细胞膜上，也表达在细胞浆中。③构建AICL，LILRB5的慢病毒载体，建立AICL，LILRB5稳转细胞系，并在稳转HLA-I类分子的221细胞，220细胞中，检测LILRB5对HLA分子的影响，免疫共沉淀寻找细胞内与LILRB5相互作用的蛋白，同样能够检测到其与内源性HLA分子的结合；而AICL则不能与内源性HLA分子的结合。LILRB5的高表达不但显著的增强了HLA-I类分子的表达，而且抑制非经典的HLA-I类分子的提呈。AICL在肝癌细胞中的高表达对Entosis并无显著性的影响；AICL，LILRB5稳转肝癌细胞Bel7402在悬浮状态下的凋亡率与对照组也无显著性的差异。综上所述，我们通过AICL，LILRB5等天然免疫分子对肝癌细胞抵抗失巢凋亡和对HLA分子的调控机制的研究；进一步揭示肝癌细胞逃避免疫监视的分子机制，为肝癌转移的靶向性治疗奠定基础。