中文摘要：

由于结核病死灰复燃、耐多药结核病出现、卡介苗保护的不确定性，使得控制结核病的两条途径-治疗和预防捉襟见肘，所以需要另辟蹊径，寻找新的抗结核药物和疫苗来摆脱目前的困境。1998年，法国的巴斯德研究所完成了结核分枝杆菌标准株H37Rv全序列的测序工作，从而也使结核病的研究迈入了后基因组时代，这使得在分子水平设计新的抗结核药和新疫苗提供了可能。本课题拟采用体内诱导的抗原技术（IVIAT）。构建结核分枝杆

结论摘要：

结核杆菌侵入人体后，为了适应体内的环境，会启动一系列基因的表达，这些基因有可能是结核杆菌逃避免疫系统攻击、侵入并在吞噬细胞内繁殖，进而引起疾病的关键基因。本研究应用体内诱导的抗原技术（IVIAT）不通过动物模型直接筛选出病原体进入人体后才特异表达的基因，这些基因有可能作为候选的免疫及药物分子新靶位。本研究用表达载体pET30构建H37Rv基因组表达文库。应用IVIAT的原理，用结核病人血清对该文库进行筛选，对筛选得到的阳性克隆测序，与结核杆菌基因组数据库比对后确定开放阅读框。 经过筛选、测序和比对，本实验最终确定了51个开放阅读框。按照功能分类分为8类基因，其中PE/PPE蛋白家族基因3个。选定PPE15基因为研究对象构建基因敲除载体，然后将PPE15基因敲除载体电转入H37Rv菌株，用卡那霉素和蔗糖进行筛选，用PCR初步鉴定PPE15基因敲除的菌株。本研究应用体内诱导抗原技术（IVIAT）筛选到了51个结核杆菌进入人体后诱导表达的基因，并对基因的功能作了初步探讨，在找寻结核杆菌在人体内生存以及致病关键基因的道路上前进了一步，为结核病的预防和治疗分子靶位的研究积累了有价值的资料。