Xa-25(t)是我们从水稻体细胞突变体HX-3中鉴定出的一个广谱抗白叶枯病新基因,该基因已被定位到第4染色体长臂末端。本研究利用02428和HX-3构建的F2大群体,对Xa-25(t)进行精细定位研究,并根据国际水稻基因组测序数据,开展候选基因的功能预测和界定,设计相关引物对HX-3基因组DNA进行高保真PCR扩增,获得Xa-25(t)侯选基因全长gDNA片段,并克隆测序。设计引物对HX-3的cDNA进行扩增,获得侯选Xa-25(t)全长cDNA片段,并转化感病水稻,进行功能互补试验。为水稻抗白叶枯病分子育种提供新的基因,并为研究抗白叶枯病的分子机制和阐述组织培养诱发水稻抗病性变异机理提供有用信息。
Xa25是我们从细胞突变体HX-3中鉴定出的一个广谱抗白叶枯病新基因,并已被定位到第4染色体长臂末端。本项目研究主要是利用图位克隆的方法分离Xa25,为水稻抗病分子育种提供目的基因。利用HX-3和两个感病材料02428和金刚30,我们构建了两个F2大群体,并对以前得到的02428/HX-3的DH群体的抗性进行了修正,同时利用最近发布的水稻SSR标记,对02428/HX-3的双单倍体(DH)群体进行分析,将Xa25定位到RM17571和RM5506之间,再根据水稻基因组测序结果,开发设计新的Indel标记,进一步将Xa25定位到Indel 40和RM17578之间的约40kb的区间内,预测有3个候选基因,分别是一个功能未知的表达蛋白、乙烯响应因子和质膜ATP酶,其中乙烯响应因子与植物抗逆有关,被认为是Xa25的候选基因。设计引物扩增HX-3的(突变体)和感病供体材料明恢63(野生型)的基因组DNA,得到全长候选基因片段,并克隆测序,发现二者有4个碱基的替换,这可能与HX-3的抗病有关。目前正在做转基因互补实验,以确定Xa25的候选基因。本项目研究发表论文6篇,申请国家发明专利1项。