家蚕微孢子虫是家蚕微粒子病的病原,专性细胞内寄生。家蚕微粒子病的研究一直是蚕业科学研究的重点和难点。本研究主要针对三种可能参与孢子感染和宿主相互作用的主要孢壁蛋白(P32.7、P30.4、P25.3),采用RT-PCR、间接免疫荧光检测、胶体金免疫电镜定位,质谱等技术对三个蛋白的表达谱、显微定位、糖基化位点鉴定等方面进行了深入研究。我们已经完成了对孢壁蛋白P30.4、P32.7、P25.3的基因克隆及原核表达。RT-PCR结果表明P32.7在感染后24h即可检测到转录,而P30.4,P25.3则在感染后36小时可检测到转录本。免疫电镜结果表明P32.7主要位于外壁,而P30.4,P25.3定于于内壁上。生物信息学分析P30.4、P32.7、P25.3具有N-糖基化位点,凝集素亲和层析实验鉴定了这三个蛋白为糖蛋白。此外,我们建立一种新的孢壁蛋白提取方法,通过蛋白组学方法鉴定了除这三种主要蛋白外的另外11种潜在的孢壁蛋白,发现P32.7、P25.3在发芽过程中脱落与发芽的存在相关性。同时通过免疫共沉淀方法鉴定一种新孢壁蛋白SWP26,发现该蛋白在体外可以家蚕培养细胞结合,可能参与粘附过程。
英文主题词Nosema bombycis;spore wall protein;expression;localization;glycosylation site