中文摘要：

本研究拟构建带有HCV核心蛋白固相化标记的含较完整HIV-1 PR靶序列结构域的噬菌体PR核心识别序列随机突变体展示文库，使用抗HCV核心蛋白单克隆抗体结合PR切割，筛选高度PR敏感的单克隆噬菌体，并以此为基础构建新的PI类药物体外噬菌体筛选模型。本系统相比传统药物筛选方法具有下列优点(1) 能根据特定HIV-1 PR快速筛选出并应用相应酶切位点(检测底物)构建噬菌体筛选模型，大幅提高针对突变株PR抑制剂的特异性与敏感性。(2)通过较完整HIV-1 PR靶序列结构域的表达，尽可能的模拟了体内PR切割底物的真实情况，提高了筛选效率。(3)是一种全新的体外药物筛选系统，不仅可与传统方法相互补充，而且还具有其自身的特点如提高敏感性，简便快速，对耐药突变反应快，并可用于生物大分子、中药、海洋药物等的筛选。

结论摘要：

本研究中我们构建了系列HIV-1 Gag蛋白 CAP2/NC 蛋白酶切割位点序列随机化噬菌体展示文库，用HIV SF2 PR对上述文库进行切割筛选，获得了敏感噬菌体克隆，噬菌体克隆可被HIV PR切割，并被PI特异抑制;本研究还进行多种HIV PR的表达与纯化及活性鉴定;并在上述基础上成功构建了HIV SF2 PR切割展示HIV-1 CAP2/NC切割位点的噬菌体模型，该噬菌体PI筛选模型为国内外首次建立，可以用作HIV PI大规模体外筛选，并具有一定的优势，申请了国家发明专利，实现了原计划的研究目标,同时也为HIV PI耐药突变的功能分类提供了一新的研究方法。另外我们还进行了免疫球蛋白结合分子的分子进化研究，获得了2种新的在天然分子中不存在的Ig结合分子结构形式，并显示出独特的Ig结合特征，其中F7分子被选择应用于A-G(F7)分子被用作固定CAP2/NC SAT、TNS、NSA切割位点NNS随机化噬菌体展示文库的标签分子，并首次验证了新型进化免疫球蛋白结合分子LD3和LD5对VH3和Vκ的双位点协同结合特性，明显提高对IgM和IgA的亲和力，在免疫抗体检测方面具有较大的应用前景。