本课题研究纳米基质辅助电泳-化学发光成像检测蛋白质多态性的新方法。内容包括高分离度的纳米材料的合成,表面修饰,电泳分离及化学发光成像的方法学与操作条件。在此基础上,以人血中的亲血珠蛋白,白蛋白,转铁蛋白和磷酸酶的多态性研究作为主要内容,研究不同探针技术对化学发光成像检测灵敏度的影响。为凝胶电泳进行蛋白质多态性研究提供灵敏的成像分析新方法。
我们按照项目计划书的内容研究了电泳分离-化学发光成像检测的新方法。我们的工作分为四个方面的内容.首先,我们利用强氧化剂过硫酸盐对含有-S-S-的蛋白质的氧化作用所产生的氧自由基,采用发光成像检测技术对Hp的三种亚型进行了成功检测;接着我们又利用梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳-直接化学发光成像联用技术,分离及检测了大鼠肝细胞内的胞浆酶,并与传统的成像分析相比,灵敏度和分析速度都有了很大的提高;我们并研究了纳米基质辅助凝胶电泳分离蛋白质的方法。在所实验的各种纳米材料中,我们发现碳纳米管可以有效地提高凝胶电泳分离蛋白质的分离度,使原来在一维电泳中无法获得分离的两种重要血清蛋白Apo A-I载脂蛋白和C3补体成分获得完全分离;我们还将纳米基质辅助分离技术用于毛细管电泳,分离了多种生物碱和肾上腺素类药物,有效地提高了毛细管电泳的分离度。本项目达到了预期目标,其成果对利用电泳分离-化学发光成像检测蛋白质多态性及研究药物及生物分子的毛细管电泳分离提供了高效的分离手段。