在"中医血虚证模型分子基础的研究(39770887)"及"四物汤组方原理的基础研究(30070913)"的工作基础上,采用二维电泳,蛋白质组学分析,生物质谱分析、分析化学及生物信息学技术,从蛋白质水平确定血虚证模型血清的"证相关蛋白质群",并以四物汤反证,观察治疗前后的"证相关蛋白质群"的动态变化,找出与血虚证发生密切相关的蛋白质组学特征。此研究丰富了四物汤在整体、器官、細胞和分子水平作用机理研究,并为血虚证模型分子基础的系统研究增加新内容。該方証研究模式对于中药作用机理、物质基础、中药复方配伍规律研究具有重要的指导意义;对中医药研究方法体系和中药新药的研发具有重要的实际意义。
课题采用射线照射、环磷酰胺腹腔注射或综合放血法建立了三种血虚证模型,在组织、细胞和血清等水平发现蛋白的变化规律,分析确定血虚证模型的"证相关蛋白质群",并以四物汤干预观察治疗前后的"证相关蛋白质群"的动态变化。研究发现血虚证的"证相关蛋白质群"包括①造血细胞分化相关蛋白如carbonic anhydrase I,galectin-3,galectin-12;②造血细胞迁移相关蛋白cofilin,dystrophin,dystonin;③DNA损伤修复蛋白如DNA-dependent protein kinase,histone deacetylase-3;④细胞周期相关蛋白galectin-12,translationally controlled tumor protein;⑤凋亡相关蛋白Annexin 1,clusterin;⑥信号转导相关蛋白H-Ras,calmodulin;⑦氧化损伤相关蛋白Peroiredoxin-V,glutathione S-transferase。"证相关蛋白质群"在疾病状态时发生变化而失去平衡,四物汤干预使紊乱的证相关蛋白质群恢复平衡。