中文摘要：

对活性物质进行快速的筛选是药物研发中先导化合物发现的关键技术。蛋白激酶抑制剂作为潜在的抗癌、抗肿瘤治疗药物而成为研究的热点。目前的蛋白激酶活性筛选方法如稳定同位素法、酶联免疫法、毛细管电泳法和荧光多肽法等都具有一定的局限性。本项目拟建立一种基于γ-P-18O-ATP稳定同位素质谱技术的蛋白激酶抑制剂筛选的新方法。该方法具有上述四种筛选法的所有优点灵敏度高、速度快、而且经济便宜、适用于大规模的药物筛选。我们将进行一系列的实验来证明稳定同位素标记的γ-P-18O-ATP与非标记ATP的等效性、在激酶反应体系中的稳定性以及测试数据的精确性。方法建立后，将应用到复杂多激酶体系中的现场测定如在细胞裂解液直接进行特种激酶活性的检测，或进行一孔多激酶体系的实验筛选等；最后，我们将针对蛋白激酶研究体系结合理论筛选方法，对大规模小分子库进行快速高效的实体筛选，为激酶抑制剂的研究建立科学的依据。

结论摘要：

对活性物质进行快速的筛选是药物研发中先导化合物发现的关键技术。蛋白激酶抑制剂作为潜在的抗癌、抗肿瘤治疗药物而成为研究的热点。目前的蛋白激酶活性筛选方法如稳定同位素法、酶联免疫法、毛细管电泳法和荧光多肽法等都具有一定的局限性。本项目建立了一种基于γ-P-18O4-ATP稳定同位素质谱技术的蛋白激酶抑制剂筛选的新方法。该方法具有上述四种筛选法的所有优点灵敏度高、速度快、而且经济便宜、适用于大规模的药物筛选。实验以PKA为模型，kemptide为底物模拟肽，采用非放射性18O稳定同位素标记ATP的γ-磷酸根，并与非标记的ATP进行平行测试，现有实验证明了稳定性同位素标记的γ-P-18O4-ATP与正常ATP的等效性、在激酶反应体系中的稳定性以及采用已知激酶抑制剂测试方法的精确性，解决了蛋白激酶抑制剂筛选新方法的关键问题，并应用于自行设计合成的PKA抑制剂类似物的活性测试，且已经将该方法应用于非纯化状态的激酶进行现场活性测定，所测的IC50值基本与文献符合。