中文摘要：

现代医学已证实糖尿病肾病（DN）的发生和发展与肾素-血管紧张素系统（RAS）失常密切相关, RAS阻断药能够延缓DN的进展（A级证据），但其临床应用受限。中医学者们在临床实践中已形成一个共识，即"瘀血阻络"几乎是贯穿DN全过程的主要机制，因此了解DN中RAS和瘀血阻络证存在何种关系，对于中医认识DN发病机制和防治DN具有重要意义，但目前未见相关报道。本项目据此而设。即以中医络病理论为指导，对DN大鼠模型进行血瘀络阻系列指标检测，确立DN大鼠瘀血阻络模型1、观察该大鼠模型及其用化瘀通络药干预后血瘀络阻指标和RAS组分的变化，从正反两个方面进行相关性分析，以期揭示DN中RAS与瘀血阻络证之间存在何种内在联系；2. 用化瘀通络药对该模型和高糖培养的足细胞进行干预，揭示化瘀通络药的作用靶点是否在RAS的相关位点上，探求该方防治DN的可能作用途径。

结论摘要：

糖尿病肾病（DN）发生发展与RAS失常密切相关。“瘀血阻络”是DN主要机制，DN治疗多遵循化瘀通络法则，已成为中医肾病领域共识。本项目基于现代医学与中医学对DN不同角度的认识，旨在探索RAS和瘀血阻络证的关系，并探求化瘀通络的作用靶点是否与RAS相关位点有关。①瘀血阻络DN模型的建立高糖高脂联合STZ腹腔注射制备大鼠糖尿病（DM）模型。16周末对肾皮质进行大体及光镜、电镜观察，与空白对照组比较，模型组（M组）肾脏体积增大，肾小球肿胀肥大，基底膜均质性增厚且结构杂乱，系膜基质增多，足突节段性融合，呈现DN典型病理改变；加之24h尿蛋白定量升高，表明DN模型制备成功。检测血液粘稠度和流动性的主要指标（血脂、血流变、血小板、血凝），均提示血液存在高粘、高凝状态，结合爪掌、尾静脉紫暗瘀血表现，与瘀血阻络中医证候特征相符，表明DN模型存在瘀血阻络证候。②化瘀通络中药对瘀血阻络DN模型的干预作用对模型大鼠灌胃化瘀通络中药颗粒混悬液16w。与M组比较，治疗组大鼠肾小囊腔较宽，系膜增生有所改善，超微结构清晰，基底膜节段增厚，足突少部分融合；24h尿蛋白定量、肾功能及肾脏指数均有显著改善，提示化瘀通络中药对DN具有肾保护作用，也反证了“瘀血阻络”的存在。比较大鼠外在瘀血表现及血液相关指标，均提示化瘀通络中药能改善DN大鼠瘀血阻络证候。③化瘀通络中药对DN模型RAS组分改变的影响化瘀通络中药干预模型大鼠16w，留取肾皮质，检测RAS各组分，模型ACE-AngⅡ-AT1轴各组分均上调、ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴各组分均下调，化瘀通络中药可一定程度拮抗此异常表达，对部分靶点（ACE蛋白、ACE2 mRNA、Mas mRNA表达）作用优于阳性对照药厄贝沙坦。④DN模型RAS组分与瘀血阻络证的相关性分析血浆粘度和不同切变率下全血粘度与肾皮质ACE2 mRNA及其蛋白的表达均呈负相关，与ACE mRNA及其蛋白的表达均呈正相关。⑤化瘀通络中药对高糖刺激下足细胞的干预作用对许可条件下条件性永生化小鼠足细胞进行3个时间点12个中药浓度的高糖加药MTT试验，高糖可抑制足细胞增殖，中药可部分逆转此效应，最佳浓度为100ug/ml。对非许可条件下分化成熟的足细胞行高糖加最佳浓度药物干预，高糖能促进Col-Ⅳ分泌、上调胞浆ACE、下调ACE2表达，中药干预48h能不同程度逆转以上效应。