中文摘要：

维生素C（Vc）工业是我国医药领域的一项支柱产业，目前采用由3株菌参与的两步发酵工艺。在第二步由普通生酮基古龙酸菌（俗称小菌）将山梨糖转化为2-酮基-L-古龙酸过程（糖酸转化）中，山梨糖的高效转化是中国两步发酵技术的主要优势和特色，而国内外关于该菌山梨糖生物氧化机制的研究甚少，对糖酸转化的生化途径和酶类及相关基因还不清楚，成为Vc发酵技术进步的主要障碍。我们纯化得到了一种负责糖酸转化的醌酶，并通过

结论摘要：

维生素C（Vc）工业是我国医药领域的一项支柱产业，目前采用由3株菌参与的两步发酵工艺。在第二步由酮古龙酸菌（俗称小菌）将山梨糖转化为2-酮基-L-古龙酸过程（糖酸转化）中，山梨糖的高效转化是中国两步发酵技术的主要优势和特色，而国内外关于该菌山梨糖生物氧化机制的研究甚少，对糖酸转化的生化途径和酶类及相关基因还不清楚，成为Vc发酵技术进步的主要障碍。我们在前期工作中分离得到了酮古龙酸菌的山梨糖脱氢酶（SDH）和山梨酮脱氢酶（SNDH）基因，本研究在此基础上表达并纯化了SDH和SNDH，并研究了两种酶的性质。建立了山梨糖生物氧化的体外反应体系，证明山梨糖能够籍SDH的作用转化为2-酮基-L-古龙酸（KGA）。在大肠杆菌和葡糖杆菌中实现了SDH的表达，发现在葡糖杆菌中表达SDH影响了宿主的糖代谢。利用转座子诱变从小菌中筛选得到山梨糖代谢缺陷变株，通过文库筛选发现了PQQ电子传递相关蛋白PX81。分离了吡咯喹啉醌（PQQ）生物合成基因，引入这些基因能够使大肠杆菌合成PQQ。