中文摘要：

我国乙型肝炎病毒是引起爆发性肝衰竭和慢性肝脏疾病的最主要病因，慢性化和重型化机制不清楚，病毒变异是重要因素；目前缺乏高效的抗病毒治疗，此外药物治疗可促进变异株产生。目前针对拉米呋啶耐药和HBeAg阴性病人的HBV变异株仍缺乏有效的干预措施。本实验拟在RNA多聚酶Ⅲ启动子（U6）的控制下，以C基因启动子相对保守的目的序列为模板，构建在肝细胞中稳定产生短发夹环干扰RNA的载体，通过转染HepG2 22

结论摘要：

我国乙型肝炎病毒是引起爆发性肝衰竭和慢性肝脏疾病的最主要病因，目前仍缺乏高效的抗病毒治疗。本课题针对HBV DNA多聚酶末端蛋白区和HBV DNA C基因启动子区构建能产生发夹样小干扰RNA的质粒P1/RNAi、C2/RNAi,C4/RNAi。将C2,C4,P1/RNAi质粒转染HepG2.2.15细胞后，结果发现细胞培养上清及细胞内HBV DNA含量比HepG2.2.15细胞单纯培养组明显降低，Western blot检测HBcAg表达也显著减少，C2、C4、P1/RNAi转染HepG2.2.15后细胞中HBcAg显著低于对照组(分别为42.26±1.22、25.1±2.3、33.10±1.51 vs 79.6±4.27,P<0.01)。同时C2,C4/RNAi对HBeAg阴性病人的HBV变异株也有有效的抑制作用(细胞DNA水平从106降至103)。进一步实验证实siRNA 并未引起HBV C启动子甲基化，本实验未在转录水平发现RNAi抗HBV作用。本实验证实针对HBV C启动子的siRNA可有效抑制HBV复制，但抑制作用可能不在转录水平，仍在转录后水平。