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用mRNA展示技术研究原始蛋白结构起源
  • 项目名称:用mRNA展示技术研究原始蛋白结构起源
  • 项目类别:面上项目
  • 批准号:30870520
  • 申请代码:C050201
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2009-01-01-2011-12-31
  • 项目负责人:张红雨
  • 负责人职称:教授
  • 依托单位:山东理工大学
  • 批准年度:2008
中文摘要:

蛋白质起源是生命起源研究的核心课题之一。通过分析小分子配体在蛋白质空间中的分布模式,我们提出了蛋白起源的小分子诱导/选择模型。本项目采用mRNA展示技术对该模型进行了初步实验验证。主要研究结果包括1)采用小盒式文库策略构建了基于亲水/极性氨基酸的随机肽库。2)通过mRNA展示技术从该随机肽库中筛选到一个ATP结合蛋白序列;构建了原核表达载体PET28-bA,表达、纯化了ATP结合蛋白并采用圆二色谱对其二级结构进行了研究,在此基础上对其晶体生长条件进行了筛选。3)采用圆二色谱(CD)方法初步验证了ATP、NAD和NADH对随机肽的结构诱导作用。4)采用同源模建的方法将属于c.1折叠类型的Flavodoxin (PDB: 2FZ5) 中的16个晚起源氨基酸用早起源的氨基酸进行了替换,构建了原核表达载体PET-28bF,经表达、纯化后对突变型黄素氧化还原蛋白的性质进行了研究,证明其仍具有相当的生物活性。这从另一个角度证明了原始蛋白起源的小分子诱导/选择假说。这一系列结果初步证明小分子对蛋白起源的诱导/选择作用,对理解蛋白质起源机制有比较重要的意义。

结论摘要:

英文主题词origin of proteins; fold; small-molecule ligands; mRNA display technique


成果综合统计
成果类型
数量
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利
  • 获奖
  • 著作
  • 15
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