中文摘要：

蛋白尿是慢性肾炎进展的核心因素。肾小球滤过屏障（内皮细胞、GBM和足细胞）功能障碍是形成蛋白尿的主要原因。血管内皮细胞生长因子（VEGF）是一种促进血管生成的因子，VEGF通过自分泌的方式作用于足细胞（通过VEGFR1），同时多数VEGF蛋白穿过肾小球基底膜（GBM）作用于内皮细胞（通过VEGFR1和VEGFR2），从而导致肾小球滤过屏障损伤。肺气亏虚、卫表不固、热毒内扰、肾失封藏是慢性肾炎发生蛋白尿的重要中医病机。本研究采用嘌呤霉素氨基核苷（PAN）单次颈静脉注射法建立PAN肾病模型，实验大鼠分为正常对照组、模型组、蒙诺组及益气清热膏大、中、小剂量组，于1、3、5、10、14、21天分别收集血、尿及肾组织标本。从VEGF等的分子表达变化观察益气清热解毒法对肾小球滤过屏障的影响，探讨慢性肾炎（气虚外感热毒证）的中医病机理论及药物干预效应的分子基础，丰富中医"肾主藏精、封藏失职"的理论内涵。

结论摘要：

本研究先从理论层面论证慢性肾炎从肺论治的科学性。在实验方面，通过动态观察氨基核苷嘌呤霉素（PAN）大鼠模型的蛋白尿、肾脏病理及滤过膜屏障相关分子的变化趋势，发现益气清热膏可降低PAN大鼠第9天、14天尿蛋白（P<0.01）。该作用与蒙诺相当。益气清热膏可显著升高大鼠总蛋白（TP）和白蛋白（Alb）（P<0.05）；降低总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平（P<0.05），该作用与蒙诺相当。病理模型组术后第10天出现系膜细胞及基质增生，球囊粘连，小管上皮空泡变性，蛋白管型，间质炎性细胞浸润，第15天加重。电镜发现第3天出现肾小球足突融合，线粒体肿胀。上述改变于术后第10天加重，第15天自发缓解。益气清热膏可显著减轻上述病理改变，与蒙诺相当。免疫组化显示，Nephrin在术后第3天表达下降，第15天最低，益气清热膏和蒙诺均可提高nephrin表达。分子生物学检测显示podocin和CD2AP的表达在术后各个时间点均明显下降，益气清热膏和蒙诺均可显著升高podocin和CD2AP表达（P<0.01）。RT-PCR及半定量分析结果显示，nephrin、podocin和CD2AP 的mRNA水平在术后各时间点均升高，益气清热膏和蒙诺可以显著降低上述分子的mRNA水平（P<0.01）。模型组总VEGF-A的蛋白及mRNA表达在造模后第三天开始明显升高，随着时间延长，VEGF-A表达逐渐增加，益气清热膏和蒙诺均可以降低VEGF-A的蛋白及mRNA表达（P<0.05）。对VEGF-A受体的研究，我们通过RT-PCR检测发现模型组VEGFR1在造模后第三天即可见明显的表达升高，在第十天达到高峰，第15天呈下降趋势；VEGFR2在造模后第三天即可见显著升高，之后逐渐升高。益气清热膏可以显著降低VEGFR1和R2表达(P<0.05)。综上益气清热膏可降低PAN 大鼠尿蛋白水平，提高血清白蛋白，改善血脂代谢，修复足细胞损伤。其机制可能是抑制VEGF高表达，从而上调肾组织中nephrin、podocin及CD2AP蛋白表达，反馈性抑制其mRNA水平，维持足细胞裂孔隔膜完整性相关。该研究揭示了益气清热膏治疗蛋白尿的作用机制，阐释了“慢性肾炎从肺论治”的科学内涵，为临床治疗蛋白尿提供了新的治疗思路。发表核心期刊论文8篇，培养硕士研究生5名，博士研究生1名。