利用F2群体(S52 ffMMAA×H34 FFmmAA),采用BSA策略,筛选与黄瓜性型基因M紧密连锁的分子标记(包括SRAP、AFLP、SCAR、SSR等标记),在F2大群体(1000株)中进行精细定位,并最终整合到已构建的连锁图上,为进一步的基因克隆打下基础。利用M/m基因的近等基因系,通过cDNA抑制性差减杂交(SSH)方法筛选与M相关的特异表达基因。分析乙烯对近等基因系M表型的影响,研究
黄瓜性型受3对主要基因(F、M和A)控制雌性株(F_M_)、雌雄异花同株(ffM_)、雄全株(ffmmA_)、两性花株(F_mm)、全雄株(ffaa)。基因型M_植株只有单性花,mmA_植株具有两性花。本项目对黄瓜性型遗传进行分析,进一步验证了M基因的遗传方式。全雌株、强雄株、两性花株和雄全株对药剂处理的反应很一致,即乙烯利诱导产生雌花,AgNO3诱导形成雄花,说明F和M基因均与乙烯作用密切相关。RT-PCR分析黄瓜植株顶芽和花芽,S06(FFMM)和H34(FFmm)植株的基因表达量相近,M06(ffMMAA)的ACS1和ACS2基因没有表达或表达量极低。由回交群体建成的Mm和mm RNA池中,性型相关基因的表达未呈现明显差异。用乙烯利和AgNO3处理H34植株,ACS2、ACS3、ACS4、ACO2和ACO3的表达量有差异,其中ACS2被乙烯利完全抑制,而乙烯利明显促进ACS4的表达;其余基因的表达不受影响。利用SRAP和SCAR等标记对M基因进行了定位,获得连锁标记8个,其中M两侧的连锁标记为ME1E26(5.4cM)和ME1E23(1.0cM),ME8SA7与M基因共分离。