中文摘要：

EOLA1(内皮细胞高表达脂多糖相关因子1)是我们从受脂多糖激活的人脐静脉内皮细胞中克隆的新基因，它可能在炎症刺激时胞内信号转导中起着作用。本项目拟通过原核表达系统取得EOLA1蛋白抗原，免疫家兔后制备抗EOLA1多克隆抗体；以酵母双杂交钓取与EOLA1相互作用蛋白；构建强制表达EOLA1质粒，转染内皮细胞，筛选出阳性细胞后再用制备的抗EOLA1多抗进行Western杂交验证，建立可诱导的稳定强制表达EOLA1内皮细胞株；另外，采用RNA干扰技术，构建诱导后能在细胞内表达小干扰RNA、特异沉默EOLA1基因的重组质粒，转染内皮细胞，经Western 杂交检验，建立可诱导的稳定下调表达EOLA1内皮细胞株；培养细胞，观察长时间强制或抑制EOLA1表达，对内皮细胞形态、脂多糖刺激后细胞活化状态、细胞生长和周期的影响，从而了解EOLA1基因在内皮细胞炎症反应中的作用，阐明其功能。

结论摘要：

EOLA1(内皮细胞高表达脂多糖相关因子1)是我们从受脂多糖激活的人脐静脉内皮细胞中克隆的新基因，其功能尚不清楚。本课题研究中，我们首先通过原核表达系统取得EOLA1蛋白抗原，免疫小鼠后成功制备了抗EOLA1多克隆抗体；再以酵母双杂交技术钓取与EOLA1相互作用蛋白，并经免疫共沉淀、哺乳细胞内配体间双杂交测试和荧光共定位验证了EOLA1与金属硫蛋白2A(MT2A)在细胞内和细胞外均可发生相互作用；进一步构建可诱导强制表达EOLA1质粒，转染内皮细胞，经压力筛选后建立可诱导的稳定高表达EOLA1内皮细胞株；另外，采用RNA干扰技术，特异阻断EOLA1基因表达。分别观察到诱导EOLA1高表达后，细胞生长明显加速，而抑制EOLA1表达后，细胞生长延迟的现象。我们的研究结果表明EOLA1蛋白在内皮细胞中参与了与细胞生长相关的调控作用，可能在炎症反应中发挥细胞内自我保护作用。