类神经钙素B蛋白1(CBL1)是一种植物钙信号的传导器,它把钙信号传递给他的下游分子,CBL相互作用蛋白激酶23(CBL interaction protein kinase23,CIPK23)。CBL1和CIPK23信号转导途径,在植物应答逆境环境(例如,低钾,渗透压,盐胁迫,冷冻和干旱)中起了重要作用。本项目目标是研究CBL1在体外的结构基础,进而为阐述上述功能特征奠定基础。首先将沙冬青植物中的CBL1基因去除前端的疏水性较强的氨基酸,将截短的沙冬青CBL1(AmCBL1Δ17)野生型基因及其突变基因构建入pET-22b(+)载体,转化入BL21(DE3)过表达,经过Ni柱亲和层析,DEAE离子交换层析和分子筛层析纯化后筛选晶体,其中突变体AmCBL1Δ17-123衍射能力最好,收到一套2.9?的衍射数据,数据经过处理,该晶体的空间群为P21212,晶胞参数为a =99.87 ?, b =114.42 ?, c = 63.80?, a=β=r=90.00。一个不队称单位中含有3个蛋白质分子。硒带CBL1蛋白已经获得,晶体的衍射能力较弱,没有获得理想的相位数据。
英文主题词Crystallographic structure,CBL1, CIPK23,Resiatance