中文摘要：

肾小球足细胞损伤是肾小球疾病中十分常见的病变，是致肾小球硬化的重要原因。研究表明，肾上腺髓质素(AM)可通过cAMP-PKA信号转导通路对肾脏发挥保护作用，但其对足细胞的作用及其分子机制甚不明。课题申请人拟在以往对AM作用研究的基础上，从足细胞细胞间接触（CCT）入手，通过体内、外实验和形态结合功能的研究手段，采用激光共聚焦显微镜、免疫电镜、转基因、基因干扰和蛋白质分析技术等方法，以阐明AM与其受体结合后的信号转导通路，尤其重点开展对AM受体组分、Rho GTPases家族成员(Rac1和RhoA)、以及足细胞CCT形成和细胞骨架蛋白重排的研究；并探讨AM在大鼠PAN微小病变病模型中，对足细胞的足突修复和CCT的调控作用的分子机制。通过上述研究，以期待进一步阐明AM对足细胞损伤的可能保护机制，从而为AM将来用于临床的前景提供理论和实验依据。

结论摘要：

肾小球足细胞是构成肾小球滤过膜的重要结构之一，其足突之间形成特殊的细胞间接触（CCC）即裂孔膜（SD），细胞粘附分子及骨架蛋白对于维持SD结构完整性，乃至肾小球的滤过功能发挥重要作用。肾上腺髓质素（AM）可发挥肾脏保护作用。体外研究表明，当足细胞遭受损伤时，表达增强的AM可与其受体相结合，通过cAMP-PKA通路发挥保护作用，但其机制甚不明。腺苷酸环化酶活化剂Forskolin可通过调控Rho GTPases成员活性的变化而促进足细胞CCC形成。因此，足细胞经AM作用后，位于cAMP-PKA通路的下游靶分子尤其是Rho GTPases家族成员，可能发挥对细胞粘附分子及骨架蛋白的重要调控作用。在体外研究中，经免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察，AM促使细胞粘附分子及骨架蛋白均向CCC集聚表达；经GST-pull down法检测发现，AM可显著上调RhoA、Rac1及Cdc42的酶活性水平，且可完全被RAMP2 siRNA阻断。在上述效应中，AM与forskolin作用相似，且可被PKA抑制剂H89显著阻断。经免疫沉淀法检测发现，AM可促进Rac1-CD2AP-Cortactin之间的相互作用，H89可显著抑制由AM所致Rac1-CD2AP的相互作用。进一步研究发现，AM可显著拮抗由PAN所致细胞骨架蛋白及Rho GTPases活性的改变，该作用可被H89显著阻断。在体内研究中，SD大鼠被分成对照组、PAN处理组和AM治疗组，PAN处理组大鼠尿蛋白及血肌酐水平显著高于对照组，足细胞特异性骨架蛋白包括synaptopodin、nephrin等表达显著下降，足细胞足突广泛消失；而AM可显著改善由PAN所致的肾功能损伤，并显著升高synaptopodin / nephrin的表达，促进足突恢复。综上所述，本研究首次证实，AM可促进足细胞CCC形成，其作用机制可能与AM可上调Rho GTPases 酶活性，从而促进细胞粘附分子、骨架蛋白及肌动蛋白的重排密切相关，该效应部分由cAMP-PKA信号通路介导。RAMP2是介导AM效应的关键受体组分。AM可显著改善大鼠PAN肾病模型的蛋白尿水平，并显著促进足突形成及细胞骨架蛋白的表达。本研究结果为进一步阐明AM对足细胞的可能保护机制，及未来AM可能用于临床防治肾病的的前景，提供较新颖的研究角度、实验依据及理论基础。