中文摘要：

青光眼是一种发病机制复杂的视神经变性疾病，单一靶点药物的视神经保护作用并不理想。双七他克林是人工合成的多靶点神经保护药物，具有拮抗NMDA受体、抑制胆碱酯酶、调控钙离子通道、抑制一氧化氮合酶等多种药理作用。前期实验发现，双七他克林对谷氨酸诱导的视网膜节细胞损伤具有保护作用，结合近来提出的基于疾病设计的多靶点药物比单一靶点药物具有更好的治疗潜力的理论，我们推测"双七他克林可以通过多个靶点保护视网膜节细胞"，拟在不同的作用环节进行干预研究（1）对视网膜节细胞NMDA受体的影响，（2）对视网膜节细胞钙通道的影响，（3）对视网膜胆碱酯酶的影响，（4）对视网膜节细胞一氧化氮合酶的影响。通过体外和在体研究，从多个层面论证我们的设想。本课题将进一步揭示双七他克林防治青光眼中视网膜节细胞损伤的作用及机制，为多靶点药物用于青光眼的视神经保护治疗提供理论依据和实验资料

结论摘要：

青光眼是全球排第二位的致盲性眼病，视网膜节细胞是主要的靶细胞。细胞凋亡是主要的死亡形式，可能与谷氨酸毒性、钙离子超载、一氧化氮毒性等有关。目前临床上还没有针对视网膜节细胞的神经保护治疗药物。对于青光眼这种发表机制复杂的神经变性疾病，最近的基因组研究表明多靶点药物可能比单一靶点药物具有更好的疗效。 双七他克林是一种多靶点的神经保护药物，具有抑制乙酰胆碱酯酶，N-甲基-D-天门冬氨酸受体，神经型一氧化氮合成酶等作用。既往研究证实双七他克林对谷氨酸诱导的视网膜节细胞损伤具有保护作用。 本研究体外实验发现，双七他克林对大鼠视网膜节细胞N-甲基-D-天门冬氨酸受体具有抑制作用，抑制50μM的N-甲基-D-天门冬氨酸产生电流的半数抑制浓度IC50值为0.82 ± 0.03μM，斜率因子为1.05 ±0.14，而美金刚胺抑制50μM的N-甲基-D-天门冬氨酸产生电流的IC50值为3.37 ± 0.05μM，斜率因子为0.97 ±0.15, 美金刚胺的IC50值明显高于双七他克林。双七他克林对α-氨基羟甲基恶唑丙酸受体和海人藻酸受体没有抑制作用。1μM的双七他克林和1μM的美金刚胺都可降低谷氨酸引起的钙离子内流。正常视网膜节细胞表达少量的神经型一氧化氮合成酶，但在谷氨酸刺激后表达升高，双七他克林可以减少一氧化氮合成酶的表达，可能通过抑制神经型一氧化氮合成酶减少谷氨酸的兴奋性毒性，保护视网膜节细胞。 在大鼠视网膜缺血再灌注模型中，通过升高前房压力至110mmHg，造成视网膜缺血。双七他克林可以抑制视网膜节细胞减少，抑制视网膜电图a波和b波振幅的降低，抑制P53蛋白的表达，对视网膜缺血性损伤有明显的神经保护作用。他克林和双七他克林对视网膜乙酰胆碱酯酶的半数有效抑制浓度IC50值分别是296.28nM和2.43nM，两者相差120倍。林贝氏作图显示，均是混合抑制，抑制常数Ki值分别是99.6 nM和2.5nM。 本研究从体内体外实验，证实了双七他克林通过多种药理作用，保护视网膜节细胞，对青光眼视神经病变具有潜在的治疗价值。