本研究在利用cDNA-AFLP技术筛选出甘蓝显性核不育相关片段的基础上,通过电子克隆和基因组步移相结合的方法获得甘蓝果胶甲酯酶抑制因子全长基因,并借助反义RNA干扰技术,对该基因功能进行分析。从而为阐明雄性不育形成机理提供重要依据,并为通过调控果胶甲酯酶抑制因子基因表达控制植物的育性,获得雄性不育材料奠定基础。
本项目在甘蓝显性雄性不育基因表达谱的比较研究的基础上,利用其中一个PMEI差异表达片段信息,通过电子克隆结合PCR技术获得BoPMEI基因的完整信息,进一步利用启动子分析与反义干扰技术阐明BoPMEI对花粉发育的重要作用。通过本研究发现BoPMEI在成熟花粉中特异表达。通过原核表达的BoPMEI蛋白并对PMEI蛋白活性鉴定发现,该蛋白具有明显的果胶甲脂酶抑制活性。利用转基因对BoPMEI进行反义干扰获得雄性不育转基因植株,这些植株的花粉萌发受到显著抑制。这些结果表明,BoPMEI是一个在成熟花粉具有重要作用的功能基因。