中文摘要：

周围神经损伤及损伤后神经缺损的修复是亟待解决的临床问题。自体神经移植疗效好，但来源有限，研制组织工程化神经替代自体神经成为热点。本研究拟从猕猴脂肪组织分离出脂肪干细胞，用共培养法进行诱导，检测其细胞表型和功能特征；以hrGFP标记的脂肪干细胞作为种子细胞，分别以经化学萃取的去细胞异体神经和具辐射状裂隙结构的丝素蛋白作支架，通过在体外的三维培养，构建具有特定结构和生物活性的组织工程化神经并修复自体25mm肘上桡神经缺损，观察种子细胞在体内的生物学行为和功能状态，采用电生理、金荧光逆行示踪、免疫学和组织学检查比较分析不同来源的两种天然材料支架构建的人工神经的修复效果，寻求更适合于临床应用的组织工程化神经，为组织工程化神经产品的开发提供新思路，在周围神经损伤的修复方面进行一些有益的尝试。

结论摘要：

周围神经损伤及损伤后神经缺损的修复是亟待解决的临床问题。自体神经移植疗效好，但来源有限，研制组织工程化神经替代自体神经成为热点。（1）本研究从猕猴脂肪组织分离出脂肪干细胞，培养的猕猴脂肪干细胞可向成脂、成骨方向分化，流式细胞仪检测其表达间充质干细胞的CD分子、不表达造血干细胞的CD分子。通过共培养的方法可以将猕猴脂肪干细胞诱导为类许旺细胞，用免疫细胞化学方法和Western-blot技术证实类许旺细胞表达许旺细胞的标志蛋白S100、GFAP。携带hrGFP的慢病毒载体转染ADSCs，磁珠分选后GFP阳性细胞可达91.11%。GFP基因表达不随细胞传代而消失。（2）用TritonX-100和脱氧胆酸钠化学萃取猕猴腓总神经制备去细胞异体神经，HE染色、免疫组化和扫描电镜检测发现制备的去细胞神经支架已去除许旺细胞及髓鞘，保留基底膜主要成分。采用纵向循序降温-热诱导的相分离处理方法，制备丝素蛋白支架。扫描电镜横切面可见其成多孔状，纵切面可见纵行裂隙。分别在这两种支架提取液中生长的许旺细胞，光学显微镜、细胞周期分析和MTT检测发现细胞的形态、细胞活性和增殖在两种支架提取液中与普通DMEM/F12培养液中无明显差异。表明这两种支架均无细胞毒性。将许旺细胞分别注入这两种支架，细胞均生长良好并表达S100。表明这两种支架均有很好的生物相容性。（3）以去细胞异体猴神经和丝素蛋白导管作支架，修复猕猴25mm肘上桡神经缺损。术后5个月采用电生理、伸腕功能检查、免疫学和组织学检查比较分析不同来源的两种天然材料支架的修复效果。结果发现去细胞神经组的各项指标均优于丝素蛋白导管组。将转染GFP的猕猴脂肪干细胞注入去细胞异体神经，体外构建组织工程化神经并修复猕猴25mm肘上桡神经缺损，术后5个月以自体神经组做阳性对照评价其修复效果并在术后不同时间点观察种子细胞在体内的转归。术后7天移植物冰冻切片可见带绿色荧光的梭形细胞，术后1个月和3个月可见散在细条状或小块状的绿色荧光物质。术后5个月组尚未到取材时间。